این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران، جلد ۲۹، شماره ۱۷۲، صفحات ۱۰۰-۱۰۹
عنوان فارسی ساخت پلاسمید نوترکیب بیان کننده ژن AID تحت کنترل پروموتر حساس به حرارت باکتریوفاژ لامبدا
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: آنزیم Activation-induced cytidine deaminase (AID) یک آنزیم اختصاصی لنفوسیت‌هایB  در هایپرموتاسیون سوماتیک و نوترکیبی تعویض کلاس ژن‌های آنتی‌بادی در فولیکول های لنفوسیت B ارگان های لنفاوی محیطی می‌باشد. بیان نا به جای این آنزیم منجر به موتاسیون در سلول‌های غیر از لنفوسیت‌های B و حتی در باکتری Escherichia coli شده است. با این وجود، القای موتاسیون در باکتری Escherichia coli  توسط بیان آنزیم AID، نیازمند بهینه سازی شرایط مطلوب و کنترل شده می باشد. بنابراین هدف این مطالعه تولید یک پلاسمید  بیانی AID تحت کنترل پروموتر حساس به حرارت از باکتریوفاژ لامبدا می‌باشد. مواد و روش‌ها: در مرحله اول، جداسازی ژن AID از پلاسمید نوترکیب PGEMT حاوی AID انجام شد. ژن تخلیص شده در پلاسمید PTG19-T در باکتری E.coli سوش Top10 کلون شد و سپس در یک پلاسمید بیانی القایی با دما حاوی پروموتر چپ باکتریوفاژ لامبدا و رپرسور حساس به حرارت cI857 منتقل و در باکتری E.coli قرار داده شد. در مرحله آخر، ژن مقاومت به تتراسایکلین جایگزین ژن مقاومت این پلاسمید نوترکیب شد. یافته‌ها: ژن AID در پلاسمید حاوی رپرسور حساس به حرارت cI857 از باکتریوفاژ لامبدا انتقال یافت. صحت توالی و چارچوب خوانش توسط الکتروفورز محصولPCR، استفاده از روش‌های هضم آنزیمی وهمچنین تعیین توالی ژنAID، تایید شد. استنتاج: ژن AID به‌طور موفقیت‌آمیزی در پلاسمید حاوی پروموتر حساس به حرارت از باکتریوفاژ لامبدا کلون شد. این پلاسمید نوترکیب می تواند در سویه های مختلف باکتریE.coli  جهت تولید سویه های mutator استفاده شود.  
کلیدواژه‌های فارسی مقاله AID، سویه mutator، پروموتر چپ فاژ لامبدا
عنوان انگلیسی Construction of the Recombinant Plasmid Expressing AID under the Control of Temperature-sensitive Promoter of Bacteriophage Lambda
چکیده انگلیسی مقاله Background and purpose: Activation-induced cytidine deaminase (AID) is a B-cell specific enzyme responsible for somatic hypermutation (SHM) and class switch recombination (CSR) of antibody genes within the B-cell follicle of peripheral lymphoid organs. Ectopic overexpression of the enzyme leads to mutations in non-B cells and Escherichia coli (E.coli) genes. However, induction of mutations in E.coli by expression of AID requires highly regulated conditions. Therefore, the aim of this study was to construct a plasmid expressing AID under the control of tightly regulated temperature-sensitive promoter of bacteriophage lambda.. Materials and methods: The AID gene was isolated from PGEMT recombinant plasmid, containing AID and cloned into PTG19-T vector. Then, AID was ligated to an expression plasmid under the control of left promoter of bacteriophage lambda and mutant thermolabile cI857 repressor. Finally, the resistance marker of the engineered plasmid was replaced by tetracycline resistance gene. Results: The whole open reading frame of AID was ligated into a plasmid containing a cI857-sensitive receptor lambda bacteriophage. The sequence and reading frame accuracy of the cloning was confirmed by electrophoresis of PCR products on agarose gel, restriction enzyme digestion, and nucleotide sequencing methods. Conclusion: In current study, the AID was successfully cloned into an expression plasmid containing thermo-sensitive promoter of bacteriophage lambda. The recombinant plasmid could be used in different strains of E.coli to produce mutator strains.  
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله AID, mutator strain, lambda PL promoter
نویسندگان مقاله نسیم حافظی | Nasim Hafezi
PhD Student in Immunology, Faculty of Medicine, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran PhD Student in Immunology, Molecular and Cell Biology Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran
دانشجوی دکترای ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران دانشجوی دکترای ایمونولوژی، مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران

ابوالقاسم عجمی | Abolghasem Ajami
Professors, Department of Immunology, Faculty of Medicine, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran Professors, Molecular and Cell Biology Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran
استاد، گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران استاد، مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران

رضا ولدان | Reza Valadan
Assistant Professor, Department of Immunology, Faculty of Medicine, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran Assistant Professor, Molecular and Cell Biology Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran
استادیار، گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران استادیار، مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی مولکولی دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران

نشانی اینترنتی http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3030-3&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/119/article-119-1476915.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده ایمونولوژی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی-کامل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات