این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
زیست فناوری، جلد ۱۰، شماره ۲، صفحات ۱۶۵-۱۷۲
عنوان فارسی تعیین توالی، کلونینگ و بیان چپرون DnaK از باکتری باسیلوس هالودورانس سویه Guj۱
چکیده فارسی مقاله اعضای خانواده پروتئین‌های شوک حرارتی 70 (Hsp70) از اجزای مرکزی شبکه سلولی چپرون‌های مولکولی و کاتالیزکننده‌های تاخوردگی هستند. ژن کدکننده یک پروتئین مربوط به Hsp70 یا DnaK در حوزه باکتری‌ها dnaK نامیده می‌شود. پروتئین‌های DnaK در تاخوردگی ازنو پروتئین، تشکیل و تفکیک کمپلکس‌های پروتئینی و تخریب پروتئین‌های بدتاخورده دخیل هستند. ژن dnaJ که کدکننده Hsp40 در باکتری‌ها است، با نقش کوچپرونی تنظیم‌کننده فعالیت‌های DnaK است. در این مطالعه، DnaK از باکتری باسیلوس هالودورانس Guj1 (Bacillus halodurans Guj1) را شناسایی، کلون و بیان شد. ژن dnaK از باسیلوس هالودورانس Guj1، با استفاده از سیستم‌ بیانیpET-28a+ به‌طور موفقیت‌آمیز در اشریشیا کلی سویه BL21 (DE3) بیان شد. قالب صحیح خوانش ژن کلون‌شده، دارای 1839جفت‌باز بوده که کدکننده 612 باقی‌مانده آمینواسیدی است. وزن مولکولی و pI محاسبه‌شده پروتئین به‌ترتیب 18/66کیلودالتون و 55/4 است. توالی آمینواسیدی به‌دست‌آمده باسیلوس هالودورانس Guj1 حدود 60% با همتای خود در E. coli یکسانی دارد. ساختار سه‌بعدی DnaK در باسیلوس هالودورانس با الگو قراردادن ساختار کریستالی BiP (عضوی از خانواده HSP70 در انسان) ساخته شد، که نشان‌دهنده یکسانی 88/08% با هم است. DnaK نوترکیب که توسط تیمار حرارتی به‌طور جزئی خالص شد، در SDS-PAGE یک باند تقریبا 70کیلودالتونی دارد. یافته‌های ما نشان داد که DnaK نوترکیب، بهبوددهنده کارآیی 27% دوباره تاخوردگی کربونیک‌انهیدراز بعد از قرارگیری در °C54 به‌مدت یک‌ساعت است. بنابر نتایج به‌دست‌آمده، DnaK از باسیلوس هالودورانس به‌طور ذاتی می‌تواند به‌منظور بهبود ویژگی‌های عملکردی آنزیم‌ها و پروتئین‌ها، در کاربردهای مختلف استفاده شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله Bacillus halodurans، DnaK، کلونینگ، فعالیت چپرونی
عنوان انگلیسی Sequencing, cloning and expression of DnaK chaperone from Bacillus halodurans Guj1
چکیده انگلیسی مقاله Hsp70 family members are central components of the cellular network of molecular chaperones and folding catalysts. The gene encoding a protein related to Hsp70 or DnaK in the domain bacteria is called dnaK. DnaK proteins are involved in de novo protein folding, formation, and disassembly of protein complexes and degradation of misfolded proteins. The gene dnaJ which codes for Hsp40 in bacteria, modulate the activities of DnaK by acting as co-chaperone. In the present study, we cloned and expressed DnaK from Bacillus halodurans Guj1 were identified. The dnaK gene of B. halodurans was successfully expressed in E. coli BL21 (DE3) using pET-28a+ expression system. The open reading frame of the cloned gene contained 1839bp and encoded 612 amino acid residues. Calculated molecular weight and pI of the protein were 66.18kDa and 4.55 respectively. The deduced amino acid sequence of B. halodurans Guj1 showed about 60% identity with the E. coli counterpart. The 3D structure of dnaK from B. halodurans was constructed using the crystal structure of human HSP70 chaperone BiP as the template, which showed an identity of 88.8% together. Partially purified recombinant DnaK by heat treatment showed a band at approximately 70kDa on SDS-PAGE. Our findings showed that the recombinant DnaK improved the refolding efficiency of the carbonic anhydrase by 27% after 60min at 54°C. According to the results obtained, DnaK from B. halodurans can potentially be used for improving the functional properties of enzymes and proteins in various applications.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Bacillus halodurans, DnaK, Cloning, Chaperone activity
نویسندگان مقاله فاطمه وحدانی | F. Vahdani
Biology Department, Science Faculty, University of Guilan, Rasht, Iran
گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه گیلان، رشت، ایران

حسین غفوری | H. Ghafoori
Biology Department, Science Faculty, University of Guilan, Rasht, Iran
گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه گیلان، رشت، ایران

سجاد صاری خان | S. Sarikhan
Molecular Bank, Iranian Biological Resource Center (IBRC), Academic Center for Education, Culture and Research (ACECR), Tehran, Iran
مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران، جهاد دانشگاهی، تهران، ایران

نشانی اینترنتی http://journals.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-22-13607-2&slc_lang=fa&sid=22
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/899/article-899-1675799.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات