این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
زیست فناوری، جلد ۳، شماره ۲، صفحات ۱-۱۲
عنوان فارسی بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپA در E.‌coli از یک ژن مصنوعی
چکیده فارسی مقاله نوروتوکسین‌های بوتولینوم، سمی ترین ترکیبات بیولوژیک شناخته­­ شده‌اند که باعث ایجاد فلج عضلانی می­شوند. خاصیت آنزیمی این توکسین‌ها، مهار آزاد­سازی میانجی عصبی استیل کولین را باعث می­شود. مطالعه حاضر با هدف تولید نوترکیب بخش کاتالیتیک (زنجیره سبک) سم بوتولینوم تیپ A با درصد خلوص بالا، به‌منظور ارزیابی فعالیت آنزیمی انجام‌شد. توالی ژن زنجیره کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A از پایگاه ژنی NCBI گرفته‌شد. پس از بهینه‌سازی کدون ترجیحی ژن مورد‌ نظر برای E.­coli، توالی نهایی ژن به‌منظور سنتز در وکتور بیانی pET28a(+) سفارش داده شد. پس از انتقال وکتور بیانی نوترکیب دارای ژن مذکور به میزبان E.­coli BL21-DE3 ، فرایند بیان در شرایط استاندارد انجام شد. در ادامه تولید پروتئین مورد نظر به شکل محلول با بهینه سازی کشت میزبان و بیان پروتئین صورت پذیرفت. پروتئین بیانی به وسیله ستون Ni-NTA تخلیصو با آنتی بادی اختصاصی مورد تأیید قرار گرفت. در این تحقیق بالاترین میزان بیان به شکل محلول، در شرایط غلظت 5/0 میلی مولار IPTG، با جذب نوری 5/0 و زمان القای 18 ساعت در دمای 18 درجه سانتی گراد به‌دست آمد. آزمایش‌های وسترن بلات و الایزا، وجود پروتئین هدف را تأیید‌کردند.براساس نتایج، زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A به شکل محلول تولید شد. فرایند تخلیص نیز با رزین تمایلی با کیفیت عالی انجام شد به طوری‌که پروتئین مورد نظر با درصد خلوص 98 به‌دست آمد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی The Recombinant Expression and Purification of Botulinum Neurotoxin type A Catalytic Domain in E. coli, from a synthetic gene
چکیده انگلیسی مقاله Botulinum neurotoxins are the most known toxic biological compounds, which cause neuroparalysis. The enzymatic activity of these enzymes causes the inhibition of acetylcholine release. The aim of this study is the recombinant production and high purification of BoNT/A light chain and evaluation of its enzymatic activity. The sequence of this target gene was obtained from NCBI. After codon usage optimization for E. coli, the final gene sequence was ordered for the synthesis on pET28a (+). The recombinant expression vector was transformed into host cell E.coli BL21 (DE3). The expression process was performed under standard conditions. In order to the protein production in a soluble form, optimization of host cell culturing and protein expression was carried out. The expressed protein was purified by Ni-NTA affinity chromatography, and confirmed by specific antibody.In this study, the high yield expression in soluble form was obtained at OD = 0.5, in 0.5 mM IPTG at 18°C in 18 hours. Western blot and ELISA analyses confirmed the BoNT/A light chain.The results indicated that the light chain of BoNT/A was produced in soluble form, and the purification process was performed with high quality so that the final protein was acquired with 98% purity index.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله فیروز ابراهیمی |
عضو هیات علمی دانشگاه امام حسین
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

علیرضا فراست |
دانشجوی کارشناسی ارشد

سید جعفر موسوی | seyed jafar
عضو هیئت علمی

سامان حسینخانی |
عضو هیئت علمی

عباس حاجی زاده |
عضو علمی گروه

شهرام نظریان |
عضو علمی گروه

نشانی اینترنتی http://biot.modares.ac.ir/article_11408_be001d3399bfecec912c53a261c70001.pdf
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/899/article-899-187102.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات