این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
زیست فناوری، جلد ۳، شماره ۲، صفحات ۶۷-۷۸
عنوان فارسی ارزیابی نقش کائوتروپ‌‌ها، شوینده‌‌های دو یونی خنثی، خنثی و بدون بار و باردار در انحلال‌‌پذیری پروتئوم اشک در فرآیند متمرکز کردن ایزوالکتریکی
چکیده فارسی مقاله با‌توجه به تفاوت‌ فاحش، در تعداد پروتیین‌های گزارش شده در نمایۀ دوبعدی پروتئوم اشک (97 تا 250 پروتیین)، و همچنین با در‌نظر‌گرفتن ناهمگون بودن محتوای پروتیینی این نمونه، تصور بر‌آن است که عدم انحلال صحیح، عاملی مهم در ناکارآمدی بررسی‌های الکتروفورتیک اشک‌ باشد. بدیهی‌است که دستیابی به الگوی جداسازی مطلوب تنها در سایۀ حفظ حالت محلول پروتیین‌ها و جلوگیری از رسوب آن‌ها در مراحل مختلف، حاصل‌می‌گردد. متاسفانه علی‌رغم اینکه با افزایش برهمکنش‌های آبگریز، بین پروتیین‌های آلیفاتیک در نقطۀ ایزوالکتریک، احتمال رسوب پروتیین‌ها در ماتریکس ژل افزایش‌می‌یابد، به‌دلیل لزوم حفظ بار طبیعی پروتیین در بعد اول جداسازی، استفاده از شوینده‌های قوی یونی در این مرحله مجاز نمی‌باشد. در این‌جا با هدف افزایش تعداد پروتیین‌ها در نمایۀ دوبعدی، تأثیر کائوتروپ‌ها، شوینده‌های دو‌یونی خنثی، خنثی و بدون‌بار و باردار در انحلال‌پذیری پروتئوم اشک، در فرآیند متمرکز‌نمودن ایزوالکتریکی مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان‌دهندۀ از‌دست رفتن پروتیین‌ها در مراحل مختلف به‌واسطۀ رسوب در ماتریکس ژل و یا عدم بازگشت به فاز محلول در زمان آماده‌سازی و انحلال رسوب است. این بررسی همچنین نشان می‌دهد که شوینده‌های بدون بار همچون Triton¬X-100 و Tween¬80 در رفع این مشکل کاملا ناموفق هستند. شوینده‌های دو‌یونی خنثی همچون CHAPS و SB¬3-10 توانایی بیشتری برای حل محتوای هیدروفوب پروتیین‌های اشک داشته و الگوی مناسب‌تری را ارائه می‌دهند. در‌نهایت بیشترین میزان انحلال‌پذیری و بهترین الگوی جداسازی می‌تواند با استفاده از مخلوط اوره و تیوره در بافر بارگزاری و اعمال شویندۀ آنیونی SDS در مرحلۀ آماده‌سازی (با پروتکل ویژه‌ای که حذف کامل SDS و جایگزینی آن با CHAPS را تضمین کند) حاصل‌شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Evaluation of the Chaotropes, Ionic, Nonionic and Zwitterionic Detergents as Tear Proteome Solubilizers during the IEF Process
چکیده انگلیسی مقاله Proper solubilization after precipitation and keeping the purified proteins in solution during the whole separation process are very critical to achieve accurate and high resolution patterns in two-dimensional gel electrophoresis (2-DE). Chaotropes and detergents are embedded in the sample and rehydration buffers in order to prevent hydrophobic interactions between the hydrophobic protein domains and avoid loss of proteins due to aggregation and precipitation. Unfortunately, detergents used for IEF must bear no net electrical charge and only week nonionic and zwitterionic detergents may be used in this process. Because of the low solubility of proteins at or very close to their isoelectric point, it seems that choice of chaotropes and detergents can dramatically affect on2D separations, especially in the case of very hydrophobic proteomes. Considering the physico-chemical heterogeneity of tear film protein content, it is deemed that solubilization can play an important role in 2D tear proteome analysis. So herein, we investigated the effect of some various detergents and chaotropes on the solubility of tear proteome during the sample preparation and IEF process. The results illustrated a very poor performance of non-ionic detergents (Triton­X-100 and Tween­80). Zwitterionic detergents (CHAPS and SB­3-10) had a better solubilization power and provided more reliable 2D maps. Last of all a great improvement in spot number and 2D resolution is achieved using a combination of urea/Thiourea in rehydration buffer and application of SDS in the sample buffer with a modified protocol, which ensures complete removal of anionic detergent during the first step of IEF and its replacement with the zwitterionic CHAPS.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله ندا سرای گرد افشاری |
دانشجوی دکتری- دانشگاه تربیت مدرس
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

حسین نادری منش | naderi manesh
عضو هیئت علمی دانشگاه تربیت مدرس
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

مصطفی نادری |
دانشیار و فوق تخصص قرنیه، تهران، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله عج ، مرکز تحقیقات آسیب amp;amp;not;های شیمیایی، گروه چشم پزشکی
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (Baqiyatallah university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://biot.modares.ac.ir/article_11458_bf5b4937be8eb3dbc425b4215c222a3a.pdf
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/899/article-899-187108.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات