این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
سلول و بافت، جلد ۷، شماره ۱، صفحات ۱-۷
عنوان فارسی بیان فاکتور رونویسی دوپامینرژیکی Nurr۱ در سلول‏های انسانی به‏وسیله لنتی ویروس‏های نوترکیب
چکیده فارسی مقاله هدف: هدف این تحقیق تولید لنتی ویروس‏های حامل ژن Nurr1 و بیان در سلول‏های انسانی می‏باشد. مواد و روش‏ها: قطعه ژنی IRES-EGFP با آنزیم‏های Bgl ll/Not1 از ناقل pIRES2-EGFP جدا و با Klenow کور (Blunt) گردید. ناقل لنتی ویروسی pNL-EGFP/CMV/WPREdU3 با آنزیم‏های Nhe1/ Xho1 برش و دو سر آن کور شد. قطعه ژنی ایزوله شده به این ناقل منتقل شد تا سازه لنتی ویروسی (I) به‏وجود آید. سپس ژن Nurr1 با آنزیم‏های Xho1 و BamH1 از ناقل PCMX-NOT بریده و درون پلاسمید (I) خطی شده باSal1 و BamH1 منتقل شد تا سازه نهایی لنتی ویروسی (II) تولید گردد. برای تولید لنتی ویروس‏های نوترکیب، رده سلول انسانی HEK-293T را با این پلاسمید نهایی، به‏همراه پلاسمیدهای غشایی و بسته بندی لنتی ویروس ترانسفکت شد. محیط این سلول‏ها که مملو از ذرات ویروسی شده بود جمع آوری و از ستون آمیکون عبور داده شد تا ذخیره غلیظ ویروس به‏دست آید. این ذخیره برای آلوده سازی سلول‏های هدف استفاده شد. بیان EGFP در زیر میکروسکوپ به اثبات رسید و بیان ژن Nurr1 با RT-PCR سنجیده شد. نتایج: درستی مراحل کلونینگ با آنزیم‏های مربوطه اثبات شد. با میکروسکوپ فلورسنس بیان Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) در هر دو مرحله ترانسفکشن و ترانسدوکشن ثابت گردید. تکنیک RT-PCR بیان Nurr1 را در هردو مرحله به اثبات رسانید. نتیجه گیری: لنتی ویروس‏های ناقل ژن انسانی Nurr1 تولید شده و به‏دنبال آلوده سازی سلول‏های انسانی HEK-293T با ویروس‏های مزبور، سلولهای فوق ژن Nurr1 را به‏طور موفقیت آمیز بیان کردند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Expression of Dopaminergic Transcription Factor Nurr1 in Human Cells Via Recombinant Lentiviruses
چکیده انگلیسی مقاله Aim: The aim of this study was to generate recombinant lentiviruses carrying Nurr1 to express it in human cells. Material and methods: The IRES-EGFP fragment was isolated from the pIRES2-EGFP vector using restriction enzymes BglII/NotI and made blunt-ended using Klenow. The transfer vector PNL-EGFP/CMV/WPREdU3 was digested with NheI/XhoI and made blunt-ended. Finally, the isolated IRES-EGFP fragment was inserted into this lentivirus vector to generate lentivirus construct (I). The human Nurr1 gene was then isolated from the PCMX-NOT vector using BamHI and XhoI and inserted into construct (I) pre-digested with BamHI and SalI. At this step lentivirus construct (II) as our final transfer construct was generated. In order to generate recombinant lentiviruses, we then transfected the HEK-293T cell line with transfer vector plus packaging and envelope vectors. Cell medium full of virus particles was collected and passed through Amicon filters to produce a concentrated virus stock. The stock was ultimately used for transduction of fresh HEK-293T cells. EGFP expression was shown under fluorescent microscope and Nurr1 expression was analyzed using RT-PCR. Results: Enzymatic tests confirmed the correct cloning of the hNurr1gene into the lentivirus backbone. Observation by fluorescent microscopy showed EGFP expression post-transfection and post-transduction. RT-PCR demonstrated Nurr1 expression at both stages. Conclusion: In this study, lentiviruses carrying the human Nurr1 gene were produced and used for transduction of human cell line HEK-293T. The transduced cells successfully expressed the Nurr1 gene.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله موسی گردانه |
دانشگاه آزاد اسلامی، آمل، واحد آیت اله آملی، گروه زیست شناسی، آمل، ایران

عباس رحیمی شم آبادی | rahimi شم abadi
دانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی سلولی- مولکولی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

عمران اسماعیل زاده |
کارشناس ارشد ژنتیک، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

نشانی اینترنتی http://jct.araku.ac.ir/article_19889_a4c70951373c4ccbe8091d6b10678dd6.pdf
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/910/article-910-187571.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات