این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
ژنتیک نوین، جلد ۱۲، شماره ۳، صفحات ۴۴۱-۴۴۹
عنوان فارسی انتقال ژن ترکیبی زیرواحد B سم وبا- پروانسولین انسانی به قارچ صدفی (Pleurotus ostreatus) و ارزیابی حضور و بیان آن
چکیده فارسی مقاله دیابت بیماری‌ای است که در اثر آن بدن نمی‌تواند انسولین تولید و یا به‌طور مؤثر از آن استفاده کند. اگرچه انسولین نوترکیب به‌طور تجاری در باکتری و یا مخمر تولید می‌شود، ولی نیاز به توسعه سیستم‌های جایگزین برای تولید انسولین وجود دارد. در این راستا قارچ‌ خوراکی صدفی به‌عنوان میزبان برای تولید انسولین مورد بررسی قرار گرفت. برای این منظور ناقل دوتایی pcambCTB-Pins حاوی زیر واحد B سم وبا که به ژن پروانسولین انسانی الحاق شده بود، تحت کنترل پیش‌برنده gpd ساخته شد و با استفاده از روش انتقال ژن مبتنی بر اگروباکتریوم (سویه GV3101 با غلظت 8/0 (OD600nm)) در دمای هم‌کشتی ˚C25 و محیط گزینشگر حاوی هیگرومایسین و سفوتاکسیم به بافت ژیل قارچ صدفی (Pleurotus ostreatus) جدایه ایرانی (Iran1649c) منتقل شد. پس از تائید اولیه قارچ‌های تراریخت با استفاده از آزمون PCR با آغازگرهای اختصاصی، درج پایدار ژن ترکیبی پروانسولین انسانی و زیر واحد B سم وبا (CTB) در ژنوم قارچ صدفی با آزمون لکه‌گذاری سادرن تایید شد. هم‌چنین بیان این ژن ترکیبی در سطح رونویسی و پروتئین با روش‌هایی نظیر RT-PCR، الایزا و ایمونوبلاتینگ مورد تائید واقع شد و در میسلیوم قارچ‌های تراریخت میزان پروتئین ترکیبی CTB و پروانسولین انسانی 04/0 درصد پروتئین محلول کل بهدست آمد. با توجه به نتایج این تحقیق و بیان موفق ژن‌های خارجی در قارچ تراریخت، می‌توان به توسعه و تولید داروهای زیستی در قارچ‌های خوراکی امیدوار بود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Transformation of cholera toxin B subunit-human proinsulin chimeric gene to edible mushroom (Pleurotus ostreatus) and evaluation of its presence and expression
چکیده انگلیسی مقاله Diabetes is a disease in which the body does not produce or properly utilize insulin. Although insulin is predominantly made in bacteria or yeast for commercial production, there is a burgeoning need for alternative systems in the production of insulin. In this regard, edible oyster mushroom was studied as host for the production of insulin. Therefore, a binary vector pCAMBIACTB-INS was constructed containing the cholera toxin B subunit fused with human proinsulin gene under the control of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase as homologous promoter. Then it introduced into gill tissue of edible oyster mushroom, Pleurotus ostreatus isolate Iran1649c, via Agrobacterium Tumefaciens strain GV3101 (OD600nm) and co-cultivated with P. ostreatus at 25 °C on selective medium containing hygromycin and cefotaxime. After confirming Putative transformants by PCR using gene specific primers, stable integration of the CTB-proinsulin fusion gene into P. ostreatus genome was confirmed by Southern blotting analysis. Also, the expression of transgene was confirmed by RT-PCR, ELISA and immunoblotting methods and in transgenic mycelia the recombinant CTB-proinsulin showed an expression level by 0.04% of total soluble protein. In conclusion successful expression of foreign genes in transgenic mushrooms is promising for development of biopharmaceutical in edible mushrooms. medium containing hygromycin and cefotaxime. After confirming Putative transformants using PCR with specific primers, stable integration of the CTB-proinsulin fusion gene into P. ostreatus genome was confirmed by Southern blotting analysis. Also, the expression of transgene was confirmed by RT-PCR, ELISA and immunoblotting methods and in transgenic mycelia the recombinant CTB-proinsulin showed an expression level by 0.04% of total soluble protein. In conclusion successful expression of foreign genes in transgenic mushrooms is promising for development of biopharmaceutical in edible mushrooms.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله صدیقه فابریکی اورنگ | صدیقه فابریکی اورنگ


مختار جلالی جواران | مختار جلالی جواران


ابراهیم محمدی گل‌تپه | ابراهیم محمدی گل‌تپه


هوشنگ علیزاده | هوشنگ علیزاده


حسین هنری | حسین هنری


نشانی اینترنتی http://mg.genetics.ir/browse.php?a_code=A-10-109-505&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/1516/article-1516-1988680.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات