این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
فصلنامه علوم پزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران، جلد ۲۱، شماره ۲، صفحات ۸۲-۸۸
عنوان فارسی همسانه سازی ژن ddh از Corynebacterium glutamicum در راستای افزایش تولید اسیدآمینه لیزین
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: L لیزین یکی از اسیدهای آمینه ضروری است که به دلیل کاربرد بسیار در صنایع مختلف، در سال های اخیر تقاضا برای این اسید آمینه افزایش یافته و این منجر به گسترش تحقیقات برای تولید صنعتی این اسیدآمینه شده است. روش بررسی: در این پژوهش با بهینه سازی ژنتیکی سعی در افزایش بازده تولید این اسیدآمینه شد. پس از بررسی آنزیم های تاثیرگذار در مسیر بیوسنتز لیزین، ژن ddh کدکننده آنزیم دی آمینوپیملات دهیدروژناز انتخاب شد. پس از استخراج DNA کروموزومی سویه Corynebacterium glutamicum ATCC 21799 و طراحی پرایمر، قطعه ژنی جدا شده و به منظور تسهیل همسانه-سازی و تعیین ترادف نوکلئوتیدی در وکتور TAcloning کلون گردید. هضم آنزیمی دو وکتور TAcloning و pET28a توسط آنزیم های برشی SalI و EcoRI انجام و پس از تیمار وکتور با آلکالین فسفاتاز، واکنش لیگاسیون صورت گرفت. سپس در سوش E.coliDH5α و در نهایت در میزبان بیانی E.coliBL21(DE3) ترانسفورم شد. یافته ها: مشاهده باند bp1150 در نمونه های PCR و محصول پلاسمید تخلیص شده و هضم شده با دو آنزیم مذکور و همچنین نتیجه تعیین توالی نشان داد که ژن مورد نظر به درستی کلون گردیده است. بررسی میزان بیان پروتئین نوترکیب توسط ژل SDS-Page تاییدی دیگر بر صحت کلون سازی و فعالیت پروموتور می باشد. نتیجه گیری: در این تحقیق برای اولین بار میزان بیان آنزیم دی آمینوپیملات دهیدروژناز در این وکتور بیانی افزایش قابل قبولی را نشان داد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Cloning of the Corynebacterium glutamicum ddh gene in order to increasing the lysine production
چکیده انگلیسی مقاله Background: Due to wide range of application of L-Lysine, as an essential amino acid, in different industries, the demand for this amino acid has been increased and this has been led to the development of research on industrial production of L-Lysine. Materials and methods: In this study, we tried to increase the yield of production of L-Lysine by genetic optimization. After inspection of different effective enzymes in Lysine biosynthesis pathway, Diaminopimelate dehydrogenase (EC1.4.1.16) enzyme was selected. This enzyme would be coded by ddh gene. After chromosomal DNA extraction of C.glutamicum ATCC 21799 and designing of primers, the gene fragment was separated from genome by PCR with pfu DNA polymerase enzyme and was cloned in TAcloning vector for facilitation of cloning and determination of nucleotide sequence. Then, enzymatic digestion of TAcloning vector and pET28a vector were performed by EcoRI and SalI restriction enzymes which their products were ddh gene and linear vector. Ligation reaction was accomplished and for checking the accuracy of ligation, it was transformed into E.coliDH5α and finally in expression host, E.coli BL21(DE3). Results: The 1150bp band in PCR products and enzymatic digestion of extracted vectors with EcoRI and SalI, sequencing and SDS-PAGE confirmed the accuracy of cloning. Recombinant bacterial colonies were investigated and confirmed by two methods (PCR and enzymatic digestion). Conclusion: This study showed significant increased expression rate of DAP dehydrogenase enzyme in this expression vector for the first time.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله سهیل قاسمی | soheil ghassemi
islamic azad university, tehran, iran
دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (Islamic azad university science and research branch)

مهرداد هاشمی | mehrdad hashemi
tehran medical branch, islamic azad university, tehran, iran
گروه ژنتیک مولکولی دانشگاه آزاد اسلامی، واحد پزشکی تهران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی پزشکی تهران (Islamic azad university of tehran medical sciences)

عظیم اکبرزاده | azim akbarzadeh
pasteur institute, tehran, iran
انستیتو پاستور ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

سیدمحمدرضا مهرابی | seyed mohammad reza mehrabi
biotechnology pilot section, pasteur institute, tehran, iran
انستیتو پاستور ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

علی فرهنگی | ali farhangi
pasteur institute, tehran, iran
انستیتو پاستور ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

صغری چراغی | soghra cheraghi
pasteur institute, tehran, iran
انستیتو پاستور ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

زهرا صفاری | zahra saffari
pasteur institute, tehran, iran
انستیتو پاستور ایران، تهران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

هیلدا رستگاری | hilda rastegari
islamic azad university, jahrom, iran
دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی جهرم (Islamic azad university of jahrom)

نشانی اینترنتی http://www.iau-tmuj.ir/browse.php?a_code=A-10-1-338&slc_lang=fa&sid=en
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده ژنتیک
نوع مقاله منتشر شده تجربی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات