این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
فصلنامه علوم پزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران، جلد ۳۱، شماره ۱، صفحات ۷۰-۷۸
عنوان فارسی دستکاری ژنتیکی سلولهای بنیادی مزانشیمی انسانی مشتق از چربی با miR-۳۴a
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: ژن تراپی ایمن و موثر به عنوان یکی از اهداف درمانی در بسیاری از بیماری­ها در نظر گرفته می­شود. با توجه به نقش مهم سلول­های بنیادی در سل تراپی، این مطالعه با هدف تولید سلول­های بنیادی مزانشیمی مشتق از چربی انسان (hASC) با افزایش بیان miR-34a انجام شد. روش بررسی: توالی پیش ساز hsa-mir-34a  در وکتورPCDH  لنتی ویروس کلون شد. وکتور نوترکیب و دو وکتور کمکی یعنی psPAX و pMD2  با روش کلسیم فسفات به داخل HEK-293T  منتقل شدند. سوپ ویروسی جمع آوری و با اولترا سانتریفیوژ  تغلیظ شد. سلول­هایHEK-293T ترانسدیوس شده در روز چهارم با فلوسایتومتری ارزیابی شدند. پس از تعیین غلظت ویروسی، سلول­های hASC با ویروس­های تغلیظ شده ترانسدیوس شدند. استخراج RNA و سنتز cDNA به منظور ارزیابی میزان بیان miR-34a با Real Time PCR انجام شد.    یافته ­ها: توالی پیش ساز hsa-mir-34a   کلون شده در وکتور PCDH با colony-PCR و DNA sequencing تائید شد. ترانسداکشن سلول­های HEK-293T و hASC  در زیر میکروسکوپ معکوس فلورسنت دار و فلوسایتومتری مورد تائید قرار گرفتند. ارزیابی میزان بیان miR-34a در سلول­های آلوده به ویروس نوترکیب نشان داد که نسبت بیان miR-34a در گروه تست به طور معنی­داری بیشتر از گروه کنترل بود (001/0=P). نتیجه­ گیری: این مطالعه نشان دادکه از سیستم­های لنتی­ویروس­ها می­توان برای وارد کردن ژن­های خارجی نظیر miR-34a  به سلول­ها استفاده کرد. همچنین این مطالعه نشان داد که سلول­های بنیادی دستکاری شده ژنتیکی به عنوان delivery system برای انتقال miR-34a و یا هر ژن دیگری می­توانند استفاده شوند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله سلولهای بنیادی ، لنتی ویروس، ترنسداکشن، ترنسفکشن، HEK-293T ، miR-34a
عنوان انگلیسی Gene manipulation of human adipose-derived mesenchymal stem cells by miR-34a
چکیده انگلیسی مقاله Background: Safe and effective gene therapy is considered as one of the therapeutic goals in many diseases. Due to the important role of stem cells in cell therapy, this study aimed to produce human adipose-derived mesenchymal stem cells (hASCs) using the miR-34a overexpression. Materials and methods: The hsa-mir-34a precursor sequence was cloned into the PCDH lentiviral vector. The recombinant vector and two helper vectors, i.e. psPAX and pMD2, were transferred into HEK-293T cell line by calcium phosphate method. Viral supernatant was collected and concentrated by ultracentrifuge. On the fourth day, transduced HEK-293 T cells were analyzed by flowcytometry. After the determination of viral concentration, hASC cells were transduced with condensed viruses. RNA extraction and cDNA synthesis were performed in order to assess miR-34a expression level by Real Time PCR. Results: The hsa-mir-34a precursor sequence cloned into PCDH vector was confirmed by colony-PCR and DNA sequencing. Transduction of HEK-293T cells and hASCs were confirmed under fluorescent inverted microscope and flowcytometry. The assessment of miR-34a expression level in infected cells with recombinant virus showed that the expression ratio of miR-34a in the test group was significantly higher than the control group (P=0.001). Conclusion: This study showed that lentiviral systems can be used to insert actopic genes like miR-34a into cells. It also showed that genetically manipulated stem cells can be used as a delivery system to deliver miR-34a or other genes.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Stem cells, Lentivirus, Transduction, Transfection, HEK-293T, miR-34a.
نویسندگان مقاله کتایون بهمن صوفیانی | Katayoun Bahman Soufiani
PhD Candidate, Department of Immunology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
دانشجوی دکتری دانشگاه تربیت مدرس، گروه ایمنی شناسی پزشکی، دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

علی اکبر پورفتح اله | Ali Akbar Pourfathollah
Assistant Professor, Department of Immunology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
استاد دانشگاه تربیت مدرس، گروه ایمنی شناسی پزشکی، دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

مهین نیکو گفتار ظریف | Mahin Nikougoftar Zarif
Associate Professor, Blood Transfusion Research Center, High Institute for Research and Education in Transfusion Medicine, Tehran, Iran
دانشیار سازمان انتقال خون ایران، گروه هماتولوری، موسسه آموزش عالی سازمان انتقال خون ایران، تهران، ایران

احسان عارفیان | Ehsan Arefian
Assistant Professor, Molecular Virology Lab, Department of Microbiology, School of Biology, college of Science, University of Tehran, Tehran, Iran
استادیار دانشگاه تهران، گروه میکروبشناسی، پردیس علوم پایه، دانشکده زیست شناسی، دانشگاه تهران، تهران، ایران

نشانی اینترنتی http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1243-1&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده زیست شناسی مولکولی
نوع مقاله منتشر شده بنیادی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات