این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
فصلنامه علوم پزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران، جلد ۳۰، شماره ۴، صفحات ۳۸۷-۳۹۵
عنوان فارسی بررسی و مقایسه روش‌های مبتنی بر رسوب دهی و کروماتوگرافی تمایلی در تخلیص پروتئین نوترکیب استرپتوکیناز
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: تخلیص پروتئین با بازده و خلوص بالا چالشی جدی در تهیه پروتئین های نوترکیب دارویی است. از بین استراتژی­های تخلیص پروتئین هدف، روش­های تخلیص بر پایه کروماتوگرافی تمایلی مانند Ni-NTA بسیار پرکاربرد و در عین حال هزینه­بر هستند. روش­های تخلیص مستقل از ستون، مانند استفاده از پروتئین های شبیه به الاستین (ELP)، به عنوان روش­های جایگزین در حال توسعه هستند. در این تحقیق، کارایی استفاده از رزین نیکل، ELP و ترکیب آنها (ELP/Ni-NTA) در تخلیص پروتئین استرپتوکیناز مورد ارزیابی قرار گرفت. روش بررسی: ژن استرپتوکیناز توسط PCR تکثیر، در پلازمیدpET21 کلون و به سلولE.coli-Rosetta  ترانسفرم شد. پروتئین آن بیان و تخلیص شد سپس ماهیت و خلوص پروتئین به ترتیب توسط وسترن بلات و SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت. بازده خالص سازی در هریک از روش های تخلیص با میکروبرادفورد محاسبه شد.  یافته­ها: بازده خالص سازی ELP-SK-His با استفاده از ستون Ni-NTA به مقدار µg/ml 14±108 و ELP به مقدار µg/ml 16±76و ELP/Ni-NTA به مقدار µg/ml 11±88 محاسبه شد. نتایج رنگ آمیزی و وسترن بلات نشان داد که کیفیت خلوص پروتئین خالص شده با ELP/Ni-NTA بیشر از روش ELP و Ni-NTA به تنهایی بود. نتیجه­گیری: مطالعه حاضر نشان داد که ادغام روش­های خالص سازی در یک مرحله می­تواند باعث افزایش خلوص و بازده محصول نهایی در تولید پروتئین­های نوترکیب دارویی شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله پلی پپتیدهای شبیه الاستین، تخلیص پروتئین، استرپتوکیناز، تخلیص مستقل از ستون
عنوان انگلیسی Evaluation and comparison of affinity chromatography and precipitation– based methods on purification of recombinant streptokinase
چکیده انگلیسی مقاله Background: Increase of protein purity is a serious challenge in the production of recombinant therapeutic proteins. For this purpose, several strategies have been employed to purify the target protein, among which the affinity chromatography-based purification methods and tagged proteins such as Ni-NTA are common and but costly. Therefore column-free purification techniques, such as using elastin-like proteins (ELPs), are being developed as alternative method. In present study, the efficacy of Ni-NTA, ELP, and the combined Ni-NTA/ELP was evaluated for purification of streptokinase as a model protein at lab scale. Materials and methods: Streptokinase gene was amplified by PCR, cloned into pET21-ELP, and transformed into E.coli BL21 Rosetta cell. The expressed protein was then purified using the methods described above. The identity and purity of the protein were evaluated by western blot using Anti-His antibody and SDS-PAGE, respectively. The purification yield was also calculated for each method by micro-Bradford assay. Results: The purification yield was calculated as 76 ± 16 μg/ml in ELP precipitation, 108 ± 14 μg/ml in Ni-NTA purification and 88 ± 11 μg/ml in Ni-NTA/ELP combined method, respectively. The SDS-PAGE results showed that the purity of streptokinase purified by the combined method was higher than that of each method separately. Conclusion: The present study showed that the integration of purification methods in one step can increase the purity and yield in purification process of recombinant therapeutic proteins.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله ELP, Elastin like polypeptide, Protein purification, Column-free purification, Streptokinase
نویسندگان مقاله مسعود سیدین خراسانی | Masoud Seyedinkhorasani
PhD Student of Pharmaceutical Biotecnology, Nano-biotechnology Department, Pasteur Institute of Iran (PII), Tehran, Iran
دانشجوی دکتری تخصصی بیوتکنولوژی دارویی، انستیتو پاستور ایران، بخش نانوبیوتکنولوژی، تهران، ایران

ملیحه کرامتی | Malihe Keramati
Assistant Professor, PhD of Pharmaceutical Biotechnology, Nano-biotechnology Department, Pasteur Institute of Iran (PII), Tehran, Iran
استادیار، دکتری تخصصی بیوتکنولوژی دارویی، انستیتو پاستور ایران، بخش نانوبیوتکنولوژی، تهران، ایران

رضا آهنگری کهن | Reza Ahangari Cohan
Associate Professor, PhD of Pharmaceutical Biotechnology, Nano-biotechnology Department, Pasteur Institute of Iran (PII), Tehran, Iran
دانشیار، دکتری تخصصی بیوتکنولوژی دارویی، انستیتو پاستور ایران، بخش نانوبیوتکنولوژی، تهران، ایران

فرزین روحوند | Farzin Roohvand
Associate Professor, PhD of Medical Biotechnology, Virology Department, Pasteur Institute of Iran (PII), Tehran, Iran
دانشیار، دکتری تخصصی بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران، بخش ویروس شناسی، تهران، ایران

داریوش نوروزیان | Dariush Norouzian
Professor, PhD of Biochemistry, Nano-biotechnology Department, Pasteur Institute of Iran (PII), Tehran, Iran
استاد، دکتری تخصصی بیوشیمی، انستیتو پاستور ایران، بخش نانوبیوتکنولوژی، تهران، ایران

نشانی اینترنتی http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-632&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده بیوتکنولوژی
نوع مقاله منتشر شده تجربی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات