این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
دانشور پزشکی، جلد ۲۴، شماره ۵، صفحات ۱-۱۰
عنوان فارسی کلونینگ و بیان پروتئین سطحی HER۲ انسانی در سطح سلول‌های یوکاریوتی با استفاده از تکنیک‌های ترانسفکشن و ترانسداکشن به‌منظور تولید تومور در موش
چکیده فارسی مقاله مقدمه و هدف: سرطان پستان، پنجمین عامل شایع مرگ‌ومیر در سراسر دنیا بوده و در بین زنان شایع‌ترین سرطان کشنده است. HER2 یک آنتی‌ژن سطحی است که در حدود 30درصد سرطان‌های پستان، بیان افزایش‌یافته دارد. هدف این مطالعه کلونینگ ژن گیرندۀ HER2 در وکتور بیانی +pCDNA3.1/Hygro و بیان این پروتئین در سلول‌های یوکاریوتی LL2 و ایجاد مدل موشی سرطان پستان می‌باشد. مواد و روش‌ها: با تخلیص RNA، تکثیر ژن HER2 و کلون‌کردن آن در وکتور +pCDNA3.1/Hygro، سازۀ بیان‌کنندۀ ژن HER2 ایجاد و ازطریق توالی‌یابی تأیید گشت. در مرحلۀ بعد، این سازه به سلول‌های سرطانی موشی LL2 منتقل گردید. برای ایجاد ردۀ سلولی پایدار، سلول‌های ترانسفکته به‌مدت یک ماه در محیط حاوی آنتی‌بیوتیک هیگرومایسین قرار داده شدند. سلول‌های حاصله، سرعت رشد کمی داشتند و منجر به ایجاد تومور نشدند. در کنار این کار، از سلول‌های LL2 ترانسداکت‌شده با لنتی‌ویروس حاوی HER2 استفاده کردیم که حدود 106 سلول ترانسداکت‌شده به موش‌های C57BL/6 به‌روش زیرجلدی تزریق گردید. ده تا دوازده روز بعد از تزریق، تومور قابل‌لمس بود. نتایج: ژن HER2 با موفقیت تکثیر و در وکتور پلاسمیدی +pCDNA3.1/Hygro کلون شد. تزریق سلول‌های LL2 ترانسداکت و ترانسفکت‌شده با سازۀ حاوی HER2 به موش، نشان داد که فقط سلول‌های LL2 ترانسداکت‌شده با وکتور ویروسی pLEX HER2 قادر به بیان پایدار HER2 انسانی هستند. نتیجه‌گیری: با کلونینگ و بیان HER2 در سلول‌های یوکاریوتی LL2 می‌توان مدل سرطان پستان HER2+ در موش ایجاد کرد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله کلونینگ، HER2، ردۀ سلولی موشی LL2، تومور پستان، مدل موشی، ترانسفکشن،
عنوان انگلیسی Cloning and expression of human HER2 protein on eukaryotic cell surface by transfection and transduction techniques for tumorogenesis in a mouse model
چکیده انگلیسی مقاله Background and Objective: Breast cancer is the fifth common cause of death in the world and is considered as the leading cause of cancer related death among females. HER2 is a surface antigen which is overexpressed in 30% of breast cancer cases. The aim of this study was cloning of HER2 receptor gene in pCDNA3.1Hygro+ expression vector, expression of this protein in LL2 eukaryotic cell line and production of a breast cancer mouse model. Materials and Methods: The construct expressing HER2 gene was synthesized by RNA extraction, HER2 gene amplification and its cloning into pCDNA3.1Hygro+ vector. The accuracy of cloning was approved by sequencing. In the next step, the construct was transfected into LL2 mouse cancer cells. To establish a stable cell line, transfected LL2 cells were cultured in hygromycine enriched medium for 1 month. The resultant cells had a very low growth rate. Having repeated the process three times, 106 cells were eventually produced. Injection of these cells into mice led to no tumor formation. Moreover, LL2 cells transducted by HER2 containing lenti-viruse were used collaterally to form tumors. Meanwhile, 106 transducted LL2 cells were injected subcutaneously into C57BL/6 mice. A tumor nodule was tangible 10 to 12 days post injection. Results: The HER2 gene was successfully amplified and cloned into pcDNA3.1Hygro+. Injection of transfected and transduced LL2 cells into mice demonstrated that only the LL2 cells transduced by the viral vector pLEX HER2 were able to express human HER2 gene stably. Conclusion: By cloning and expression of HER2 on the LL2 cells, we could produce breast cancer model in mice expressing human HER2 on cells surface.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله کلونینگ, HER2, ردۀ سلولی موشی LL2, تومور پستان, مدل موشی, ترانسفکشن
نویسندگان مقاله یقظان ناجح طاهر |
کارشناس ارشد، گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکدۀ علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

فاطمه رهبری‌زاده |
دانشیار، گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکدۀ علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

بتول ثقفی |
دانشجوی دکتری تخصصی، گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکدۀ علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

زهیر حسن صراف |
استاد، گروه ایمونولوژی، دانشکدۀ علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

نشانی اینترنتی http://daneshvarmed.shahed.ac.ir/article_1750_8eb44d28b17a153afa1304cd25ba8476.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات