این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
زیست فناوری، جلد ۱۱، شماره ۳، صفحات ۸-۱۴
عنوان فارسی کلون‌کردن ژن survivin انسانی در وکتور پروکاریوتی pET-۲۸a و ارزیابی بیان پروتئین در باکتری E.coli BL۲۱(DE۳)
چکیده فارسی مقاله مهارکننده آپوپتوز (IAP) یک خانواده از پروتئین­ها هستند که با مهار فعالیت کاسپاز مرگ سلول را متوقف می­کنند. Survivin کوچکترین پروتئین شناخته شده از این خانواده است که در سلول­های سرطانی مشاهده می­شود اما در بافت­های نرمال بجز بافت جنینی مشاهده نشده است. survivin ممکن است به­عنوان یک مارکر جدید برای شناسایی و درمان سرطان مورد استفاده قرار گیرد. هدف از این پژوهش، کلونینگ ژن survivin در وکتور pET-28a  و بیان پروتئین در باکتری E.coli بود. ژن survivin با روش PCR و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و الگوی pcDNA-survivin  تکثیر شد. محصول PCR و پلاسمید pET-28a با آنزیم­های محدودگر  HindIII/NheIبرش داده و survivin درون وکتور برش خورده الحاق شد. سپس محصول الحاق شده به باکتری E.coli DH5a ترنسفورم و با استفاده از آنتی بیوتیک کانامایسین غربالگری شد. کلونی­ها با روش PCR ارزیابی شده و پلاسمید کلونی مثبت با روش هضم دوگانه غربالگری شده، در نهایت یک کلونی مثبت با تعیین توالی تایید شد. پلاسمید نوترکیب با روش شیمیایی به باکتری بیانی E.coli (BL21)  ترنسفورم شد. بیان survivin  در شرایط مختلف انجام و سطح بیان با SDS-PAGE بررسی شد.  اندازه قطعه تکثیرشده توسط PCR با استفاده از ژل آگارز تایید شد. پلاسمید pET-28a برش خورده نیز فعالیت آنزیمی را تایید کرد. قطعه کلون شده پس از توالی­یابی تشابه 100% با survivin انسانی داشت. افزودن IPTG موجب بیان پروتئین survivin در تمام شرایط خصوصا در دمای 37 درجه سانتیگراد از زمان 2 ساعت پس از القا شد اما در تمام شرایط، عمده survivin بیان شده در باکتری به صورت تجمعی بود.  
کلیدواژه‌های فارسی مقاله Survivin،PCR،کلونینگ،pET-28a،BL21(DE3)
عنوان انگلیسی Cloning of human survivin in pET-28a and its protein expression study in E.coli BL21(DE3)
چکیده انگلیسی مقاله   Inhibitor of apoptosis (IAP) are a family of proteins that block cell death through caspase activity. Survivin is smallest IAPs family member that overexpresses in different cancer types but not in normal tissue except embryonic tissue. Survivin may be used as a new marker to stratify cancer patients for more optimal treatment modalities. The aim of the current study was to investigate survivin DNA cloning into pET-28a and its expression in E.coli. The sequence of survivin gene was amplified by PCR using specific primers and pcDNA-survivin temple. PCR product and pET-28a plasmid were digested by HindIII/NheI restriction enzymes and survivin was ligated into the digested vector. Then, the ligation product was transformed into the E.coli DH5a competent cells and screened by antibiotic selection marker (kanamycin). Positive colonies were selected by colony PCR and screened by double digestion of isolated plasmid. One positive colony was sequenced and confirmed. The recombinant plasmid was transformed into the expression strain of E.coli (BL21) by chemical method. The expression of survivin was induced in the different conditions and expression level investigated by SDS-PAGE. The size of PCR product in agarose gel showed the correctness of amplification. The digested pET-28a plasmid also indicated the correctness of enzymatic reaction. The sequence of the cloned fragment revealed a 100% similarity to the human survivin. In expressing, adding IPTG increased the expression of survivin protein in all conditions, especially 37 ᵒC from 2 h after induction. At all conditions, most of survivin accumulated in the bacteria as inclusion body.  
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Survivin,PCR,Cloning,pET-28a,BL21(DE3).
نویسندگان مقاله مهسا تیرمومنین | Mahsa Tirmomenin
tarbiat modares university
دانشگاه تربیت مدرس

فرنگیس عطائی | Farangis Ataei
Tarbiat modares university
دانشگاه تربیت مدرس

سامان حسین خانی | Saman Hosseinkhani
tarbiat modares university
دانشگاه تربیت مدرس

نشانی اینترنتی http://biot.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-17314-4&slc_lang=fa&sid=22
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات