این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تهران، جلد ۷۴، شماره ۱، صفحات ۹-۱۵
عنوان فارسی انتقال سازه بیانی حاوی ژن‌های کایمریک IgG۱ و Fv۱ به رده سلولی تخمدان هامستر در بیان اینفلیکسیماب در سیستم بطری ‏های غلطان
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: اینفلیکسیماب (Infliximab) شکلی از آنتی‏بادی‏های نوترکیب کایمریک می‏باشد که هدف مناسبی برای مهار فاکتور نکروز توموری آلفا در بیماری‌های التهابی است. پژوهش کنونی با هدف ارزیابی بیان آنتی‏بادی منوکلونال اینفلیکسیماب در مقیاس نیمه‏صنعتی در سلول تخمدان هامستر چینی انجام شد. روش بررسی: این مطالعه با هدف تولید نیمه صنعتی، از بهمن 1393 تا مرداد 1394 در مرکز رشد دانشگاه تهران انجام گردید. وکتور حاوی ژن‌های اینفلیکسیماب، به باکتری E.coli انتقال و وجود ناقل پلاسمیدی حاوی ژن برروی ژل 2% آگارز بررسی شد پلاسمید جداسازی و توسط لیپوفکتامین 2000 (Invitrogen, Germany) به سلول تخمدان هامستر چینی ترانسفکت شد. سلول‌ها توسط G-418، دو هفته تیمار و سلول‌های ترانسفکت شده انتخاب شدند. میزان تولید اینفلیکسیماب در کلون‏های انتخابی پس از 48 ساعت با کیت الایزا IgG، مورد سنجش قرار گرفت. کلون با بیان بالا کشت و محصول با ستون افینیتی پروتیین A خالص شد. جهت تایید خلوص، از روش Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) و برای تعیین راندمان تخلیص، از تست الایزا استفاده شد. یافته‌ها: بررسی ژل آگارز، وکتور حاوی ژن را تایید نمود. ارزیابی غلظت اینفلیکسیماب پس از ترانسفکشن با استفاده از تست الایزا IgG در nm 450، بیشترین و کمترین میزان بیان را به‌ترتیب ng/ml 23 و ng/ml 6 نشان داد. در مرحله تخلیص با ستون افینیتی پروتیین A، پیک مربوط به اینفلیکسیماب، در بازه زمانی 7/0 الی 8/0 دقیقه مشاهده و راندمان تخلیص، 70% محاسبه شد و وجود باند‏های 25 و 50 کیلو دالتونی بر روی ژل پس از تخلیص حضور اینفلیکسیماب را تایید نمود. نتیجه‌گیری: در پژوهش کنونی بیان اینفلیکسیماب در مقیاس نیمه‌صنعتی با استفاده از سیستم بطری غلطان با درصد بیان بالا و راندمان تخلیص حدود 70% انجام شد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Transfection of an expressive construct including IgG1 and Fv1 genes in ovary cell line for infliximab expression
چکیده انگلیسی مقاله Background: Infeliximab is a form of chimeric antibody which neutralizes the most important inflammatory cytokine, TNF-a, in inflammatory disorders. The aim of current study was to pilot expression of chimeric infliximab in Chinese Hamster ovary (CHO) cells. Methods: In this research study, pVITRO2-neo-mcs vector that consist of infliximab light chain and heavy chain was used to transform into the E.coli by CaCl2 method. The plasmid was then purified and transfected to cultured CHO cells by Lipofectamine 2000® (Invitrogen GmbH, Germany). Transfected cells were selected upon G-418 treatment after 2 weeks and the level of expression, based on standard curve, was measured using IgG ELISA kit after 48 hours for each clone. High level expressed clone was then cultured in roller bottles and recombinant chimeric product was purified by protein A affinity chromatography. The purity of the product was analyzed by 10% gel SDS-PAGE from eluted samples. The efficacy of the purification was analyzed by ELISA before and after purification step. This article is a master's student thesis from February 2015 to August 2016 in pharmaceutical technology development center, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. Results: The purified plasmid was analyzed on 2% agarose gel. After selective pressure of G-418, 10 stable transfect clones were assessed for infliximab secretion by IgG ELISA kit at 450 nm. The maximum and minimum expression which detected by ELISA were 23 ng/ml and 6 ng/ml, respectively. The band width of infliximab fraction during purification procedure was observed at 0.7-0.8 min. The efficiency of the purification by ELISA was 70%. On SDS-PAGE analysis, two bands, 25 and 50 kDa, respect to light and heavy chains of Infliximab, was confirmed the expression of recombinant protein. Conclusion: In the current study, the construct for infliximab monoclonal antibody production was designed using genetic engineering techniques and the expression was confirmed by conventional molecular biology methods. The high yield production was carried out in semi-industrial scale using roller bottles with a 70 percentage of purification efficiency.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله زهره سرابی نژاد | zohreh sarabinejad
islamic azad university of damghan branch, damghan, iran.
گروه بیوتکنولوژی میکروبی، دانشکده فنی و مهندسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد دامغان، دامغان، ایران.
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی دامغان (Islamic azad university of damghan)

داود نوری اینانلو | davoud nouri inanlou
department of research and development, research and production complex, pasteur institute of iran, tehran, iran.
گروه ژنتیک مولکولی، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران، بخش تحقیق و توسعه، تهران، ایران.
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

شهرام تیموریان | shahram teimourian
hemmat highway, iran university, tehran, iran. tel 98 21 86703243
تهران، بزرگراه همت، دانشگاه علوم پزشکی ایران تلفن 86703243-021
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی ایران (Iran university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-5429&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله اصیل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات