این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشگاه علوم پزشکی کردستان، جلد ۲۷، شماره ۶، صفحات ۱۲-۲۲
عنوان فارسی نقش سرین ۳۱۰ در فعالیت آنزیمی و پروفایل دمایی کاسپاز-۹ انسانی
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف:  کاسپاز-9 یک آنزیم کلیدی در مسیر داخلی آپوپتوز است که فعالیت آن با سازوکارهای مختلفی مانند فسفریلاسیون تنظیم می­شود. گزارش شده است که فسفریلاسیون سرین 310 در کاسپاز-9 موشی مانع پردازش آنزیم می­شود. نقش این باقیمانده­ی آمینواسیدی در فعالیت آنزیمی کاسپاز-9 انسانی نامشخص است. در این پژوهش اثر ایجاد بار منفی روی  سرین 310 در فعالیت آنزیمی کاسپاز-9 انسانی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش­ها: با توجه به اینکه فسفریلاسیون منجر به ایجاد بار منفی در کاسپاز-9 می­شود، کدون سرین 310 در کاسپاز-9 انسانی به کدون آسپارتات با استفاده از روش جهش­زایی هدفمند Quick change جهش داده شد. کاسپاز-9 نوترکیب وحشی و جهش­یافته در سویه باکتری BL21(DE3) بیان و با استفاده از کروماتوگرافی گرایشی تخلیص شدند. پروفایل دمایی و فعالیت کاسپاز-9 جهش­یافته در مقایسه با آنزیم وحشی به کمک سوبسترای کروموژنیک Ac-LEHD-pNA در  شرایط in vitro سنجش شد. تجزیه و تحلیل آماری داده­ها با آزمون t انجام شد.  یافته‌ها: نتایج نشان داد که پارامترهای سینتیکی کاسپاز-9 جهش­یافته­ی S310D و آنزیم وحشی مشابه هستند، اما پروفایل دمایی آنها متفاوت است. آنزیم جهش­یافته­ی S310D در دمای 37 درجه­ی سانتی­گراد فعالیت بیشتر و در دماهای 4، 15، 45 و 60 درجه­ی سانتی­گراد فعالیت کمتری در مقایسه با آنزیم وحشی داشت. نتیجه‌گیری: ایجاد بار منفی بر روی سرین 310 در کاسپاز-9 بدون تاثیر بر پارامترهای سینتیکی سبب تغییر در پروفایل دمایی آنزیم می­شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله کاسپاز، سنجش آنزیمی، آپوپتوز، جهش زایی
عنوان انگلیسی The role of serine 310 in the activity and temperature profile of human caspase-9
چکیده انگلیسی مقاله Background and Aim: Caspase-9 is a key enzyme in the intrinsic pathway of apoptosis that its activity is regulated by various mechanisms such as phosphorylation. It has been reported that murine caspase-9 phosphorylation in serine 310 prevents enzyme processing. The role of this residue in human caspase-9 activity in not clear. In this study the effect of negative charge on serine 310 in caspase-9 activity was investigated. Materials and Methods: Given that phosphorylation leads to negative charge on caspase-9, the codon of serine 310 in human capsase-9 was mutated to aspartate via Quick change site-directed mutagenesis. Recombinant wild type and mutant caspase-9 were expressed in BL21(DE3) and purified by affinity chromatography. The temperature profile and activity of the mutant caspase-9 in comparison with wild type were assessed by chromogenic substrate of Ac-LEHD-pNA in vitro. Statistical analysis of data was performed using Student's t test. Results: Results showed that kinetics parameters of S310D mutant and wild type caspase-9 were similar, but their temperature profiles were different. S310D mutant enzyme had higher activity at 37 oC and lower activity at 4, 15, 45 and 60 oC in comparison with wild type caspase-9. Conclusion: The negative charge on serine 310 in caspase-9 leads to change in profile temperature of the enzyme with no effect on kinetic parameters.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Caspase, Enzyme Assay, Apoptosis, Mutagenesis
نویسندگان مقاله راحله شاکری | Raheleh Shakeri
University of Kurdistan
دانشگاه کردستان

محدثه محمودیان | Mohadeseh Mahmoudian
University of Kurdistan
دانشگاه کردستان

رضا خدارحمی | Reza Khodarahmi
Kermanshah University of Medical Sciences
دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه

سهیلا محمدی | Soheila Mohammadi
Kermanshah University of Medical Sciences
دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه

نشانی اینترنتی http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-6618-1&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده بیوتکنولوژی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی اصیل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات