این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشگاه علوم پزشکی کردستان، جلد ۲۸، شماره ۲، صفحات ۱۱-۲۱
عنوان فارسی دستیابی به بیان پایدار فاکتور ۹ انسانی نوترکیب در ردۀ سلولی تخمدان همستر چینی معلق، با بهره‌گیری از همبیانی گزارشگر فلورسنت
چکیده فارسی مقاله چکیده زمینه و هدف:  بیماری هموفیلی B، یک بیماری خونریزی دهنده ارثی است که در اثر نقص عملکرد یا کاهش سطح فاکتور انعقادی 9 فعال در خون ایجاد می شود. درمان این بیماری در حال حاضر با روش جایگزین درمانی و از طریق تزریق دوره ای فاکتور 9 مشتق شده از پلاسما یا نوع نوترکیب آن  که در سلولهای پستانداران تولید می شود، ایمن تر است، انجام می شود. در تحقیق حاضر بیان پایدار پروتئین فاکتور 9 انسانی نوترکیب در ردۀ سلولی تخمدان همستر چینی (Chinese hamster ovary cells) که برای رشد به صورت معلق در محیط کشت عاری از سرم سازگار شده اند (CHO-s)، به صورت دو سیسترونی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش­ها: در این مطالعه توالی های رمز  کننده فاکتور 9 انسانی و پروتئین فلورسنت سبز(EGFP)، به عنوان ژن گزارشگر، که توسط توالی IRES از یکدیگر جدا شده اند در وکتور بیانی pCDNA3.1 تحت کنترل پروموتر سیتومگالو ویروس(CMV) همسانه سازی شدند. سپس پلاسمید نوترکیب حاصل با استفاده از آنزیم برشگر BglII خطی شده و در سلولهای CHO-s وارد شد. سلولهای ترنسفکت شده به مدت 14 روز تحت تیمار با ماده جنتیسین (G418) قرار گرفتند. یافته‌ها: پس از 14 روز تیمار، سلولهای پایدار و مقاوم به جنتیسین زیر میکروسکوپ فلورسنت به رنگ سبز دیده شدند که حاکی از بیان EGFP در این سلول ها بود. بیان فاکتور 9 ترشح شده به محیط کشت با استفاده از تست الایزا مورد ارزیابی قرار گرفت و در نهایت با استفاده از وسترن بلاتینگ تایید شد. نتیجه‌گیری: مطالعات ما حاکی از بیان همزمان فاکتور 9 و پروتئین فلورسنت سبز توسط سازه دو سیسترونی در سلولهای CHO-s بود. فاکتور 9 به دلیل دارا بودن  پپتید نشانه به محیط کشت ترشح شد این سیستم فرایند انتخاب کلونهای نوترکیب پایدار با استفاده از سل سورتینگ را تسهیل می کند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله فاکتور 9 انعقادی، پروتئین سبز فلورسنت، دوسیسترونی، بیان پایدار، سلولهای تخمدان همستر چینی
عنوان انگلیسی Bicistronic and stable expression of the recombinant human coagulation factor IX and EGFP in suspension adapted Chinese hamster ovary (CHO-s) cells
چکیده انگلیسی مقاله Abstract: Background and Aim: Hemophilia B is a kind of bleeding disorder caused by deficiency of functional human coagulation factor IX in plasma. The treatment of hemophilia B patients is carried out through intravenous infusion of plasma derived or recombinant human coagulation factor IX (hFIX). Recombinant hFIX that is produced in mammalian cells is much safer than the plasma derived hFIX. In the current study the stable expression of the recombinant hFIX was studied in serum free and suspension adapted CHO cells (CHO-s) in a bicistronic expression system. Materials and Methods: The coding sequences of the hFIX and enhance green fluorescent protein (EGFP), as a reporter gene, with IRES sequence in between were cloned into pCDNA3.1 expression plasmid downstream to the cytomegalovirus (CMV) promoter. The recombinant bicistronic expression plasmid was then linearized using BglII restriction enzyme and transfected into the CHO-s cells. The transfected cells were treated with 400 μg/ml of geneticin (G418) for 14 days. Results: The stable recombinant CHO-s cells were visualized under fluorescence microscope, indicating in the expression of the EGFP in the cytoplasm of the cells. The expression of the hFIX was measured using ELISA and confirmed by western blotting analysis. Conclusion: Our results indicated in the expression of the both EGFP (as reporter gene) and hFIX (as therapeutic protein) in the stable CHO-s cell pool. This bicistronic expression system facilitates the selection of the recombinant clones producing high level of the hFIX using FACS.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Coagulation factor IX, Green fluorescent protein (GFP), Bicistronic, Stable Expression, Chinese hamster ovary cells (CHO).
نویسندگان مقاله فهیمه قاسمی | Fahimeh Ghasemi
Birjand university of medical sciences
دانشگاه علوم پزشکی بیرجند

فاطمه نیکومنش | Fatemeh Nikumanesh
Birjand university of medical sciences
دانشگاه علوم پزشکی بیرجند

علیرضا زمردی پور | Alireza Zomorodipour
National institute of genetic engineering and biotechnology
پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

نشانی اینترنتی http://sjku.muk.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5738-1&slc_lang=fa&sid=1
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده بیوتکنولوژی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی اصیل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات