این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تهران، جلد ۶۵، شماره ۱، صفحات ۱۳-۱۸
عنوان فارسی بررسی تولید و تخلیص استرپتوکیناز نوترکیب با استفاده از وکتور بیانی pMAL
چکیده فارسی مقاله استرپتوکیناز (SK) یک داروی ویژه و موثر در درمان ترومبولیتیک سکته‌های حاد قلبی می‌باشد. علی‌رغم وجود محدودیت‌های قابل توجه، به‌دلیل قیمت نسبتا˝ پایین استرپتوکیناز این پروتئین هنوز یک داروی انتخابی به‌ویژه در کشورهای کم‌درآمد می‌باشد. در بررسی حاضر، تولید و تخلیص استرپتوکیناز با استفاده از وکتور بیانی pMAL مورد ارزیابی قرار گرفته است.روش بررسی: ابتدا پلاسمید pMAL که حاوی ژن skc (بدست‌آمده از Streptococcus equisimilis H46A) بود، به میزبان مناسب (E.coli BL21) انتقال یافت. در مرحله بعد شرایط تولید استرپتوکیناز از نظر دما، غلظت‌های مختلف IPTG به‌عنوان القاﺀگر و نیز مدت زمان القاﺀ بهینه‌سازی شد. این پروتئین با استفاده از ستون کروماتوگرافی DEAE-Sepharose خالص‌سازی شده و در نهایت خلوص و فعالیت آن تعیین گردید.یافته‌ها: پس از بهینه‌سازی شرایط تولید، قسمت عمده پروتئین تام باکتری متعلق به SK-MBP (اسرپتوکیناز-پروتئین متصل‌شونده به مالتوز) گردید. SK-MBP خالص‌شده بر روی ژل SDS-PAGE یک باند تک را نشان داد. فعالیت بیولوژیکی SK-MBP خالص‌شده در حضور پلاسمینوژن با استفاده از سوبسترای سنتتیک (S2251) اندازه‌گیری شد که نشان‌دهنده فعالیت بالای آن بود.نتیجه‌گیری: در این مطالعه از وکتور بیانی pMAL که پروتئین فیوژن محلول (SK-MBP) را در E.coli BL21 تولید می‌کند استفاده کرده‌ایم. با استفاده از این روش، علی‌رغم بیان بالای SK-MBP، از تشکیل Inclusion body جلوگیری شد. انتخاب میزبان مناسب برای تولید پروتئین‌های نوترکیب یکی از مهمترین فاکتورهایی است که بر روی سطح بیان پروتئین مورد نظر تاثیر می‌گذارد. پیشنهاد می‌شود از میزبان‌های دیگر نیز برای این منظور استفاده شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله سترپتوکیناز، ترومبولیتیک pMAL
عنوان انگلیسی Production and purification of recombinant streptokinase using pMAL expression vector
چکیده انگلیسی مقاله Background: Streptokinase (SK) is an effective and specific thrombolytic treatment of acute myocardial infarction. Despite its significant limitations, streptokinase remains the drug of choice particularly in countries with poorer economies because of its relatively low cost. In this study, the production and purification of streptokinase using a pMAL expression vector were evaluated. Methods: The pMAL vector, including the skc gene, obtained from Streptococcus equisimilis H46A, was transformed into E. coli BL21 to produce the soluble active fusion protein SK-MBP. The conditions of SK production were optimized by manipulating temperature, induction time and IPTG concentrations. This protein was purified by DEAE-sepharose column chromatography and the final purity was determined and activity of purified SK-MBP was measured using a synthetic substrate (S2251).Results: After optimizing the production conditions, SK-MBP was the major portion of total protein. Purified SK-MBP formed a single band using SDS-PAGE and had high biological activity. Conclusion: In this study we used pMAL expression vector to produce SK-MBP in E. coli BL21. Using this method we prevented the accumulation of inclusion bodies in spite of the high level of production of SK-MBP. Choosing a suitable host organism for the production of recombinant proteins is one of the most important factors that influence the level of desired protein production. Further studies are recommended to test other host organisms for this purpose.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Streptokinase, Thrombolytic, pMAL
نویسندگان مقاله رحیم جعفری | jafari r


منوچهر میرشاهی | mirshahi m


نشانی اینترنتی http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-840&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات