این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۳، شماره ۳۶۴، صفحات ۲۲۳۲-۲۲۳۸
عنوان فارسی کلونینگ و بیان پروتئین کوتاه شده‌ی گیرنده‌ی عامل رشد اپیدرمی- ۱ در میزبان مخمر Pichia pastoris
چکیده فارسی مقاله مقدمه: گیرنده‌ی عامل رشد اپیدرمی (EGFR یا Epidermal growth factor receptor) در پاتوفیزیولوژی طیف وسیعی از تومورهای جامد نظیر گلیوبلاستوما و سرطان پستان نقش اساسی بازی می‌کند. بنا بر این، مسدود کردن آبشار پیام رسانی این گیرنده توسط آنتی‌بادی، هدف مناسبی برای درمان این سرطان‌ها می‌باشد. اولین قدم در مسیر ساخت آنتی‌بادی‌های منوکلونال تولید پروتئین نوترکیب با خلوص بالا و الگوی گلیکوزیلاسیون مشابه پروتئین انسانی است. مخمر Pichia pastoris، یکی از بهترین میزبان‌های در دسترس برای این منظور می‌باشد. روش‌ها: توالی کد کننده‌ی دومین خارج سلولی و بین غشایی پروتئین EGFR از رده‌ی گلیومای انسانی (A172) با استفاده از تکنیک RT-PCR (Real-time polymerase chain reaction) جداسازی گردید. این توالی، به داخل پلاسمید pPicZ alpha A کلون و به داخل سلول مخمر Pichia pastoris منتقل شد. سپس، این پروتئین با تیمار سلول با استفاده از متانول (غلظت نهایی 5/0 درصد) و به مدت‌های 24، 48، 72، 96، 120، 144، 168 و 192 ساعت القا شد. در نهایت، بیان آن به روش الکتروفورز Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) بررسی گردید. یافته‌ها: با هضم آنزیمی پلاسمید نوترکیب واجد توالی کد کننده، قسمتی از EGFR ساخته شد. میزان پروتئین بیان شده با افزایش طول مدت القا، افزایش یافت. با این حال، پس از گذشت 3 روز از شروع القا، پروتئین‌های ترشحی میزبان نیز در محیط کشت افزایش یافتند و بر روی ژل SDS-PAGE مشاهده شدند. نتیجه ‌ گیری: در این مطالعه، پروتئین EGFR تولید گردید که می‌تواند فرایند تولید آنتی‌بادی منوکلونال مهار کننده‌ی EGFR را به میزان چشمگیری تسریع نماید.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Cloning and Expression of Truncated Protein of Epidermal Growth Factor-1 (EGFR-1) in Pichia Pastoris Yeast Host
چکیده انگلیسی مقاله Background: Epidermal growth factor receptor (EGFR) plays a major role in the pathophysiology of a wide variety of solid tumors such as glioblastoma and breast cancer. Therefore, blocking of signaling cascade of this receptor via specific antibodies is an appropriate therapeutic target against these cancers. The first step to make monoclonal antibodies is production of recombinant protein with high purity and glycosylation pattern similar to human protein. One of the best available hosts for this purpose is the Pichia pastoris yeast. Methods: Coding sequence of extracellular and transmembrane domain of EGFR protein was isolated from human glioma cell line (A172) using real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) technique. This sequence was cloned into plasmid pPicZαA and transferred into Pichia pastoris yeast cells. Then, the production of recombinant protein was induced via treating of cells with methanol with final concentration of 0.5%, in several time periods, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 and 192 hours. Protein production was assessed using sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Findings: Partial coding sequence of EGFR was cloned in pICZαA plasmid. The results of induction of protein expression on SDS-PAGE gel showed that the protein expression increased as incubation time increased. However, after three days of induction, the secreted host proteins in the culture medium increased and got visible on SDS-PAGE gel. Conclusion: In this study, we produced EGFR protein that can dramatically speed up production process of EGFR inhibiting monoclonal antibodies.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله جواد زواررضا | zavarreza j
دانشیار، مرکز تحقیقات زیست فن آوری، پردیس بین الملل یزد، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی یزد (Shahid sadooghi university of medical sciences)

نادر خالقی | nader khaleghi
دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی مشهد (Mashhad university of medical sciences)

علی حاتمی | ali hatami
دانشجوی دکتری، گروه ژنتیک، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد مرودشت، مرودشت، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی مرودشت (Islamic azad university of marvdasht)

معصومه حیدری | heydari m
دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی یزد (Shahid sadooghi university of medical sciences)

رضا منصوری مجومرد | reza mansouri madjumerd
استادیار، گروه ایمنی شناسی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی یزد (Shahid sadooghi university of medical sciences)

محمدحسین شیخها | mohammad hossein sheikhha
استاد، مرکز تحقیقات زیست فن آوری، پردیس بین الملل یزد، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی یزد (Shahid sadooghi university of medical sciences)

مجید مجرد | majid mojarrad
استادیار، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی مشهد (Mashhad university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/5306
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-317575.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات