این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۳، شماره ۳۵۵، صفحات ۱۷۴۰-۱۷۵۱
عنوان فارسی بهینه‌سازی تولید یک آنتی‌بادی با اختصاصیت دوگانه علیه گیرنده‌ی لپتین و CD۴ انسانی و بررسی خواص آن
چکیده فارسی مقاله مقدمه: نقص در لپتین و یا گیرنده‌ی آن، اثر محافظتی در ابتلا به بیماری‌های خودایمن دارد؛ اما از آن جایی که لپتین روی سلول‌های بسیاری دارای گیرنده است، مسدود کردن همه‌ی آن‌ها عواقبی را به دنبال خواهد داشت. بنا بر این، آنتاگونیست لپتین در فرم قطعه‌ای آنتی‌بادی با ویژگی دوگانه (taFv) علیه CD4 و گیرنده‌ی لپتین ObR، از طریق هدف قرار دادن ObR فقط بر روی سلول‌های T، دارای پتانسیل درمانی برای چنین بیماری‌هایی است. این پژوهش با هدف افزایش بیان taFv مذکور انجام شد. روش‌ها: قطعه‌ی ژنی taFv، از وکتور pAB1 به وکتور pET32a ساب‌کلون شد. واکنش PCR (Polymerase chain reaction) به منظور تأیید ورود قطعه انجام گرفت. تأیید تولید پروتئین با روش‌های Dot blot، SDS PAGE (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) و Western blot انجام گرفت. تأثیر شرایط مختلف محیطی شامل محیط کشت، سویه‌ی باکتریایی، دما و غلظت IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) بر روی بیان از طریق ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) آزمایش شد. در نهایت، خاصیت زیستی پروتئین تولید شده به روش فلوسایتومتری بررسی گردید. یافته‌ها: نتایج PCR، حضور taFv را در پلاسمیدهای ساب‌کلون شده تأیید کرد. آزمایش‌های Dot blot، به وضوح افزایش بیان پروتئین را در مقایسه با وکتور قبلی و آزمایش ELISA، محیط سوربیتول‌دار، دمای C° 18، سویه‌ی E. coli BL21 (Escherichia coli) و غلظت IPTG mM 05/0 را مناسب‌تر از سایر سطوح برای بیان پروتئین نشان داد. فلوسایتومتری قابلیت اتصال taFv تولید شده به حدود 20 درصد از لنفوسیت‌ها را نشان داد. نتیجه‌گیری: امکان تولید taFv به صورت نوترکیب با قابلیت اتصال به مولکول CD4 روی لنفوسیت‌های انسان وجود دارد. همچنین، با بهینه‌سازی شرایط تولید، امکان افزایش تولید آن فراهم می‌شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Optimization of Production and Characterization of a Tandem Single Chain Fragment Variable (taFv) against Human Leptin Receptor and Anti-Human CD4
چکیده انگلیسی مقاله Background: Leptin deficiency or dysfunction in leptin receptor (ObR) signaling may tend to resistance to autoimmune diseases. On the other hand, leptin receptors exist on many cells and therefore blocking all of them will probably result in unfavorable effects. Targeted ObR blocking on specific immune cells with a leptin antagonist such as taFv (Tandem single chain fragment variable or Tandem scFv) may be advantageous for patients with autoimmune diseases. This project aimed to optimize the condition for large scale production of such molecule and to test its effect. Methods: The cloned taFv gene was sub-cloned from pAB1 to pET32a vector. The taFv fragment existence in pET32a vector was confirmed via polymerase chain reaction (PCR) method using T7 primers. Dot blotting was recruited to detect protein expression. Optimization experiments were carried out and assayed using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Finally, the functional activity was evaluated via flow cytometry. Findings: The result of PCR confirmed integration of taFv 2300 bp gene fragment in pET32a vector. Dot blotting confirmed taFv higher expression in pET32a vector compared to previous vector. It was found that media containing sorbitol, Escherichia coli BL21 strain, IPTG 0.05 mM and 18˚ C temperatures were resulted in higher production of protein levels. Based on flow cytometry, taFv was able to attach to 20% of lymphocytes. Conclusion: pET32a vector with pel B fragment is suitable for secretory overexpression. Production of taFv could be enhanced via optimizing media and culture conditions.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله لیلا ممجدی | leila ممجدی
کارشناس ارشد، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه اصفهان (Isfahan university)

سید حمید زرکش اصفهانی | seyed hamid zarkesh esfahani
دانشیار، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه اصفهان (Isfahan university)

محمد ربانی | mohammad rabbani
دانشیار، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه اصفهان (Isfahan university)

رحمان امام زاده | rahman emam zadeh
استادیار، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه اصفهان (Isfahan university)

فروزان صفری | forouzan safari
کارشناس ارشد، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه اصفهان (Isfahan university)

آرش بابایی | arash babaei
استادیار، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم، دانشگاه ملایر، ملایر، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه ملایر (Malayer university)

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/5077
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-317634.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات