این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۳۲، شماره ۲۹۴، صفحات ۱۱۱۰-۱۱۱۸
عنوان فارسی کلونینگ، بیان و ارزیابی فعالیت اگزوتوکسین A نوترکیب سودوموناس آئروژینوزا
چکیده فارسی مقاله مقدمه: امروزه در بسیاری از مطالعات مربوط به درمان سرطا‌ن‌های مختلف، از هدفمند نمودن ترکیبات سمی علیه سلول‌های سرطانی استفاده می‌شود. یکی از این ترکیبات بسیار مؤثر، اگزوتوکسین A سودوموناس می‌باشد. هدف از این مطالعه، بررسی بیان و تخلیص و ارزیابی فرم کوتاه شده‌ای از این توکسین در سیستم بیانی پروکاریوتی بود. روش‌ها: در ابتدا توالی فرم کوتاه شده‌ی توکسین (38PE) با استفاده از پرایمرهای دارای جایگاه برش آنزیمی HindIII و NdeI از روی وکتور 57-pUC حاوی این ژن تکثیر شد. بعد از برش آنزیمی، داخل وکتور b26-pET خطی شده با این آنزیم‌های برشی کلون گردید. ارزیابی و تأیید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله‌ی هضم آنزیمی و تعیین توالی، مورد بررسی قرار گرفت. وکتور نوترکیب به داخل باکتری‌های (3DE)21BL، plysS(3DE)21BL و Rosetta ترانسفورم شد و بعد از بیان و تخلیص توکسین، ارزیابی عملکرد آن در سلول‌های یوکاریوتی HUVEC و KDR293 انجام شد. یافته‌ها: توالی ژن توکسین با موفقیت تکثیر گردید و با هضم آنزیمی و تعیین توالی صحت کلونینگ اثبات گردید. وکتور نوترکیب در E.coli (Escherichia coli) بیان و به وسیله‌ی توالی هیستیدینی با موفقیت تخلیص گردید. در نهایت، توکسیسیتی توکسین تخلیص شده توسط آزمایش MTT (bromide diphenyltetrazolium-5،2-(yl-2-Dimethylthiazol-5،4)-3) بر روی دو رده‌ی سلول یوکاریوتی KDR293 و HUVEC مورد بررسی قرار گرفت. نتیجه‌گیری: با توجه به ساخت موفقیت‌آمیز وکتور نوترکیب 38PE-b26-pET و ترانسفورم آن به داخل سلول‌های پروکاریوتی، میزان بیان در سلول‌های مختلف E.coli متفاوت بود؛ به گونه‌ای که میزان بیان آن در (3DE)21BL بیشتر بود. از آن جایی که قسمت اتصالی توکسین در فرم کوتاه شده وجود ندارد، بنابراین در ارزیابی سلولی بر اساس مطالعه‌ی قبلی، دوز کشندگی آن بیش از هزار برابر بیشتر از نوع هدفمند شده‌ی آن با عامل رشد عروقی 121VEGF می‌باشد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا، 38PE، کلونینگ، بیان
عنوان انگلیسی Cloning, Expression and Evaluation of Pseudomonas Aeruginosa Exotoxin A
چکیده انگلیسی مقاله Background: Nowadays, in many studies related to the treatment of various cancers, toxic compounds are targeted against cancer cells. One of the most effective compounds is Pseudomonas exotoxin A. The purpose of this study was to investigate the expression, purification, and in-vitro evaluation of a short form of the toxin in a prokaryotic expression system. Methods: The short form of the toxin (PE38) was amplified via polymerase chain reaction (PCR) using primers containing HindIII and NdeI restriction enzyme sites from pUC57-PE38. The polymerase chain reaction product was digested and subcloned in the pET-26b expression vector. The expression vector was separately transformed into the BL21(DE3), BL21(DE3) plys S and Rosetta Escherichia coli strains. Recombinant bacteria were cultured and induced and the resulted PE38 protein purified using metal affinity column chromatography. The toxicity effect of PE38 protein was assessed on HUVEC and 293KDR eukaryotic cells. Findings: The gene was successfully cloned into the expression vector and the accuracy of construct was confirmed via restriction map analysis and sequencing. The expression was found more in BL21(DE3) than the other strains. The toxicity effect was observed at the same level for both HUVEC and 293KDR cells. Conclusion: The lethal dose of truncated toxin is more than the previous study (1000-fold), where the targeted vascular endothelial growth factor (VEGF121) was fused to the truncated toxin.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Pseudomonas auroginosa exotoxin A, PE38, Cloning, Expression
نویسندگان مقاله جهانگیر لنگری | jahangir langari
دانشجوی دکتری، گروه بیوتکنولوژی دارویی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

مجید گل کار | majid گل kar
استادیار، بخش انگل شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

حسین خان احمد | hossein khan ahmad
استادیار، گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی اصفهان (Isfahan university of medical sciences)

مرتضی کریمی پور | morteza karimi pour
استادیار، بخش پزشکی مولکولی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

رقیه آرزومند | roghayeh arezoomand
دانشجوی دکتری، گروه بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

رمضان بهزادی | ramezan behzadi
کارشناس، انستیتو پاستور ایران، واحد شمال، آمل، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

رضا آهنگری کهن | reza ahangari kohan
استادیار، بخش رفرانس هاری، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/3199
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-317938.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات