این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
زیست فناوری، جلد ۹، شماره ۱، صفحات ۱-۸
عنوان فارسی تولید رده نوترکیب ‌HEK۲۹۳T‌ با بیش- ‌بیانی پایدار ‌miR-۱‎‌ به‌عنوان مدل زیستی ‌برای مطالعات قلبی
چکیده فارسی مقاله اهداف: القای مصنوعی بیش- بیان miRNA راهکار مناسبی برای القای موثرتر تمایز سلولی است. نقش موثر miR-1 در تکوین و تمایز سلول‌های قلبی گزارش شده است. لنتی‌ویروس یک ناقل کارآمد برای تهیه رده‌های سلولی پایدار است. هدف پژوهش حاضر تولید رده سلولی با بیش- بیان پایدار miR-1 برای ایجاد یک مدل زیستی برای مطالعات قلبی بود.
مواد و روش‌ها: در پژوهش تجربی حاضر، سلول‌های HEK 293T در محیط کشت DMEM به‌همراه سرم جنین گاوی (FBS) 10% و ال- گلوتامین 2میلی‌مولار و پنی‌سیلین- استرپتومایسین 1X در محیط انکوباتور کشت داده شدند. پس از کلون‌کردن ژن miR-1، کلون‌های نوترکیب انتخاب شدند و حضور قطعه ژنی در وکتور نوترکیب با توالی‌یابی تایید شد. وکتور حامل miR-1 به‌همراه وکتورهای کمکی در سلولHEK293T به‌صورت ویروس نوترکیب بسته‌بندی شد. تراآلایی سلول‌های HEK293T با ویروس نوترکیب برای تولید رده پایدار انجام شد. سپس کارآیی تراآلایی و رقت موثر ویروس با نشانگر GFP سنجش شد. تغییرات بیان miR-1 با روش qPCR بررسی شد. تحلیل داده‌ها از طریق بررسی مقایسه‌ای چرخه آستانه و روش Pfaffl انجام گرفت.
یافته‌ها: بیشترین میزان بیان GFP مربوط به سلول‌های آلوده‌شده با رقت 150میکرومولار بود. نشانگر فلورسنت GFP موجب تسهیل فرآیند بهینه‌سازی و تخلیص سلول‌های نوترکیب شد. در ارزیابی qPCR، بیان miR-1 در سلول‌های تراآلایی شده در مقایسه با سلول‌های گروه کنترل افزایش قابل ملاحظه‌ای داشت.
نتیجه‌گیری: رده سلولی پایدار نوترکیب HEK293T بیش- بیان‌کننده miR-1 در لنتی‌ویروس، به‌عنوان مدل زیستی مناسب برای بررسی فرآیندهای تکامل و تکوین قلب است.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله microRNA-1‎،سلول‌های ‌HEK293T،تمایز سلولی،تراآلایی ویروسی سلول،مدل زیستی،
عنوان انگلیسی Production of Recombinant HEK293T with miR-1 ‎Overexpression as a Biological Model for Cardiac Studies
چکیده انگلیسی مقاله Aims: The induction of artificial over-expression of miRNAs is an appropriate approach to more effective cell differentiation. The significant role of microRNA-1(miR-1) has been reported in the development and differentiation of cardiac cells. Lentivirus is an effective vector for stable cell line production. The aim of this study was the production of recombinant HEK293T with miR-1 overexpression as a biological model for cardiac studies.
Materials & Methods: In this experimental study, HEK 293T cells were cultured in DMEM medium with 10% Fetal Bovine Serum (FBS) and L-glutamine 2mM and Penicillin-Streptomycin 1X in incubator medium. After cloning of miR-1 gene, recombinant clones were selected and the recombination was confirmed by sequencing. The miR-1 carrying vector and auxiliary vectors were packaged in the HEK293T to produce the recombinant virus. The infection of HEK293T by recombinant virus was performed in order to achieve stable cell line. Then, GFP fluorescent marker evaluated the efficiency of transfection and effective virus dilution. Finally, the alteration in expression level of miR-1 was assessed by qPCR. Data analysis was performed by comparing the threshold cycle and Pfaffl method.
Findings: The most GFP expression was detected in transfected cells by 150 micromole dilution. GFP fluorescent marker facilitated optimization and purification of recombinant cells. qPCR investigation demonstrated the significant increase in expression of miR-1 in transfected cells in comparison to controls.
Conclusion: The stable recombinant HEK293T miR-1 over-expressing cell line in lentivirus can be utilized as a suitable biological model for investigation of cardiac evolution and development processes.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله microRNA-1‎,سلول‌های ‌HEK293T,تمایز سلولی,تراآلایی ویروسی سلول,مدل زیستی
نویسندگان مقاله مهسا راسخی |
پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران

بهناز بخشنده |
گروه بیوتکنولوژی، دانشکده علوم، دانشگاه تهران، تهران، ایران

مجید صادقی زاده |
گروه ژنتیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

علی سلیمی ‌ |
مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه‌اله(عج)، تهران، ایران

مسعود سلیمانی ‌ |
گروه هماتولوژی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

نشانی اینترنتی https://biot.modares.ac.ir/article_22385_f639a89a14b2385009e75cc11caae7f7.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات