این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
زیست فناوری، جلد ۷، شماره ۳، صفحات ۴۰-۵۰
عنوان فارسی مطالعه طیف سنجی دئوکسی ریبوزیم محدود کننده: بررسی ساختار و فعالیت
چکیده فارسی مقاله دئوکسی ریبوزیم محدود کننده وابسته به کوفاکتور مس از منحصر به فرد ترین دئوکسی ریبوزیمهای شناخته شده میباشد. ویژگی این آنزیم برش اختصاصی تک رشته DNA و تشکیل ساختار DNA سه رشته است که برای شناسایی سوبسترا ضروری میباشد. روش معمول برای سنجش فعالیت دئوکسی ریبوزیمها (با سوبسترای اسیدنوکلئیکی) بر پایه استفاده از سوبستراهای نشاندار رادیواکتیو میباشد که دارای پیچیدگیها و مشکلاتی است. در مطالعه حاضر، با استفاده از طیف سنجی فلورسانس خارجی و جذب فرابنفش، روشهایی دقیق، سریع و ارزان برای مطالعه فعالیت آنزیم ارائه شده است. با توجه به اهمیت کلیدی ساختار این آنزیم در شناسایی و اتصال به سوبسترا با تشکیل ساختار سه رشته ای DNA، برای مطالعه ساختاری آنزیم از روش طیف سنجی دو رنگ نمایی دورانی استفاده شد. طیفهای به دست آمده از این روش نشان دهنده تغییرات ساختاری و شاهدی بر تشکیل DNA سه رشته در کمپلکس آنزیم-سوبسترا است. نشانگر سایبرگولد دارای تمایل بالای اتصال به DNA دو رشته در مقایسه با DNA تک رشته است. از تغییرات نشر فلورسانس سایبرگولد بعد از افزودن کوفاکتور به کمپلکس آنزیم-سوبسترا میتوان میزان فعالیت آنزیم را سنجید. در روش سنجش پررنگ شدگی پیوسته که بر پایه طیف سنجی فرابنفش است از پررنگ شدگی ایجاد شده پس از افزودن کوفاکتور به کمپلکس آنزیم-سوبسترا برای اندازه گیری فعالیت آنزیم استفاده شده است. نتایج نشان دهنده دقت بالای روش سنجش پررنگ شدگی نسبت به طیف سنجی فلورسانس خارجی است، به این دلیل که روش سنجش پررنگ شدگی بر پایه استفاده از ویژگیهای فیزیکوشیمیایی DNA و بدون دخالت عوامل خارجی می‌باشد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله دئوکسی ریبوزیم محدود کننده،فلورسانس خارجی،سنجش پررنگ شدگی پیوسته،دورنگ نمایی دورانی،
عنوان انگلیسی Spectroscopic study of restriction deoxyribozyme: Structural and activity survey
چکیده انگلیسی مقاله The Cu dependent restriction deoxyribozyme is the unique example of known deoxyribozymes. The uniqueness of this deoxyribozyme is originated from specific cleaving of single stranded DNA and formation of triple helix DNA structure which is necessary for substrate recognition and binding. The most established method for measuring the kinetic parameters of deoxyribozyme is based on use of radiolabeled substrates which have several difficulties. In this study we present accurate, fast and inexpensive methods for kinetic study of the deoxyribozyme which is based on extrinsic fluorescence and UV-visible spectroscopy techniques. As mentioned above, DNA triple helix formation is necessary for substrate identification and also enzyme activity. Circular dichroism spetropolarimetery is used for structural study of enzyme. Analysis of spectrum results from this technique indicates structural changes which is a direct evidence for the triple helix formation in enzyme-substrate complex. Extrinsic fluorescence experiment is based on high affinity of SYBR gold to double stranded DNA compared to single stranded DNA. Enzyme activity can be measured by SYBR gold fluorescence emission upon addition of cofactor to the enzyme-substrate complex. Continuous hyperchromicity assay method which is based on UV-visible spectroscopy was used for measuring of enzyme activity by hyperchromicity of the enzyme-substrate complex after addition of cofactor. Comparison of the results show that the continuous hyperchromicity assay is more accurate than the extrinsic fluorescence method, because of this method is based on intrinsic physicochemical properties of DNA without interference of external factors.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله دئوکسی ریبوزیم محدود کننده,فلورسانس خارجی,سنجش پررنگ شدگی پیوسته,دورنگ نمایی دورانی
نویسندگان مقاله محمد رضا گنجعلی خانی |
استادیار گروه زیست شناسی دانشکده علوم دانشگاه اصفهان

بیژن رنجبر |
استاد گروه بیوفیزیک دانشگاه تربیت مدرس

مهدی صادقی |
دانشجوی دکتری دانشگاه تربیت مدرس

نشانی اینترنتی https://biot.modares.ac.ir/article_22355_e745eb11f73c104d4e9859b1574fdf98.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات