این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
Journal of Reproduction and Infertility، جلد ۵، شماره ۴، صفحات ۲۹۰-۲۹۹
عنوان فارسی بررسی خصوصیات آنتی‌ژن‌های‌ سطحی اسپرم انسان توسط آنتی‌بادی منوکلونال HS۵۶
چکیده فارسی مقاله مقدمه: با وجود پیشرفت و گسترش تحقیقات در زمینه تولید مثل و ناباروری و به ‌ویژه فرآیند لقاح، در حال حاضر تعداد اندکی از آنتی‌ژن‌های مؤثر در فرآیند لقاح در سطح اسپرم و تخمک، شناسائی شده است. مطالعه این مولکول‌ها و بررسی خصوصیات بیوشیمیایی، بیوفیزیکی و فیزیولوژیکی آنها، درک هرچه بهتر فرآیند لقاح را تسهیل می‌کند. گذشته از آن، علت اصلی درصد بالایی از ناباروری‌های با علت نامشخص که ناشی از وجود نقایص مولکولی آنتی‌ژن‌های دخیل در عمل لقاح می‌باشند، لذا هدف این مطالعه تعیین خصوصیات آنتی‌ژن مورد شناسائی توسط آنتی‌بادی منوکلونال HS56 می‌باشد. مواد و روشها: سلول‌های هیبریدومای مولد آنتی‌بادی منوکلونال HS56 علیه آنتی‌ژن سطحی اسپرم انسان به صفاق موش‌های نر بالغ 8-6 هفته تزریق شدند تا مقادیر زیاد آنتی‌بادی از مایع آسیت، به‌دست آید. آنتی‌بادی مذکور توسط ستون افینیتی کروماتوگرافی پروتئین G، تخلیص و ایزوتیپ این آنتی‌بادی توسط آزمون الایزا تعیین گردید. آنتی‌ژن‌های سطحی اسپرم انسان توسط لیتیوم ‌دی‌یدوسالیسیلات (LIS) استخراج و الکتروفورز SDS-PAGE روی این آنتی‌ژن‌ها انجام گرفت. به منظور تعیین وزن مولکولی و برخی خصوصیات بیوشیمیایی آنتی‌ژن مورد نظر، وسترن بلاتینگ انجام شد و محل قرارگیری این آنتی‌ژن در سطح اسپرم انسان به کمک آزمون ایمنوفلورسانس غیرمستقیم بررسی شده و در نهایت تأثیر یا عدم تأثیر این آنتی‌ژن در واکنش آکروزومی مورد بررسی قرار گرفت. تحلیل داده‌ها بر اساس مقایسه داده‌های زوج شده و آزمون Wilcoxon Signed Ranks Test انجام و سطح معنی‌داری، 05/0 در نظر گرفته شد. نتایج: با تکنیک‌ SDS-PAGE الگوی الکتروفورتیک آنتی‌ژن‌های استخراج شده با نمک LIS، مشاهده شد و با آزمون الایزا مشخص شد که آنتی‌ژن مورد شناسایی توسط آنتی‌بادی منوکلونال HS56، در مجموعه آنتی‌ژنی استخراج شده از سطح اسپرم با استفاده از LIS، وجود دارد. ایزوتیپ آنتی‌بادی منوکلونال HS56 از نوعIgG1 تعیین شد. پس از انجام وسترن بلاتینگ، مشخص شد که وزن مولکولی آنتی‌ژن مورد نظر حدود kDa2±56 است و در ساختار مولکول پروتئین مورد نظر، باند دی‌سولفیدی وجود دارد. آزمون ایمنوفلورسانس غیرمستقیم نشان داد که محل قرارگیری این آنتی‌ژن در ناحیه آکروزومی و گردن اسپرم می‌باشد. با مجاور نمودن آنتی‌بادی منوکلونال با اسپرم و القاء واکنش آکروزومی، مشخص شد که بلوکه کردن این اپی‌توپ با آنتی‌بادی منوکلونال HS56، تأثیری در واکنش آکروزومی ندارد (11/0 =P). نتیجه‌گیری: براساس بررسی‌های انجام شده، هرچند آنتی‌ژن HS56 در ناحیه آکروزومی و سراسپرم قرار دارد ولی نقش اساسی در فرآیند واکنش آکروزومی دارا نمی‌باشد. بررسی بیشتر این آنتی‌ژن بوسیله تخلیص و بررسی ساختار مولکولی آن و نیز نقش آن در اتصال اسپرم و تخمک، ارزش این آنتی‌بادی را مشخص خواهد نمود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Characterization of a human spermatozoa surface antigens recognized by HS56 monoclonal antibody
چکیده انگلیسی مقاله Introduction: Surface antigens of ovum and sperm have key role in the fertilization process. In this regard, study of these molecules and their biochemical, biophysical and physiological characteristics could be helpful in understanding the mechanism of fertilization. Moreover, many cases of infertility with unknown ethiology have been revealed to have defects in these molecules. This will further emphasize on the importance of molecules involved in fertilization. The aim of this study was to characterize the sperm sur-face antigen recognized by the monoclonal antibody HS56. Materials and Methods: Clone HS56 with known specificity to human sperm antigen were injected perit-oneally into the balb/c mice and the produced antibody was purified over protein- G affinity chromato-graphy column. The isotype of the monoclonal antibody (mAb) was determined by Enzyme-Linked Immu-nosorbent Assay (ELISA). Surface antigens extracted from human sperm by lithinm 3,5 diiodosalicylate (LIS) method were run on SDS-PAGE and the molecular weight of antigen recognized by HS56 mAb was determined by western blotting. For localization of this antigen, indirect immunofluorescence staining was performed. Finally involvement of this antigen in acrosome reaction was tested by inhibition assay. Wil-coxon test was used for statistical analysis. Results: By LIS extraction method many sperm antigens were isolated and seen on SDS-PAGE using ELISA, It was found that LIS extraction was a useful method for isolation of antigen recognized by HS56 mAb. The subclass of the mAb HS56 was shown to be IgG1. The molecular weight of the antigen was determined to be about 56±2 KDa and the molecule included disulfide bond (s) in its structure. The antigen of interest was localized on acrosome and midpeace region of human sperm. Finally our results showed that this antigen had no effect on acrosome reaction (P=0.11). Conclusion: Although the HS56 antigen does not play an important role in acrosome reaction, its further characterization with regard to sperm-oocyte binding may reveal a role in fertilization process.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله
نشانی اینترنتی http://www.jri.ir/article/163
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/128/article-128-377068.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات