این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
زیست فناوری، جلد ۲، شماره ۱، صفحات ۰-۰
عنوان فارسی تولید لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن فاکتور نوروتروفیک GDNF با تیتر بالا و انتقال آنها به آستروسیتهای انسانی
چکیده فارسی مقاله لنتی ویروسها از جمله موثرترین ویروسهای نوترکیب برای انتقال ژن به سلولها و بافتهای پستانداران بشمار میرود. این مطالعه شامل دو بخش اساسی است: (1) بررسی کارائی ستونهای پروتئینی در تولید لنتی ویروسهای نوترکیب با تیتر بالا و (2) بکارگیری این ستونها درتولید لنتی ویروسهای نوترکیب حامل ژن فاکتورنوروتروفیک GDNF. در بخش اول مطالعه با استفاده از دو ناقل انتقال (حامل GFP یا Jred) تولید لنتی ویروس نوترکیب کردیم. با انتقال سوپرناتان سلولهای ترانسفکت شده به ستونهای پروتئینی Amicon و سانتریفوژ ستونها بیش از 99% سوپرناتان را جدا کردیم تا استوکی در حجم 500 μl از سوپرناتان غلیظ شده و مملو از ویریونها بدست آید. با افزودن رقتهای مختلف این استوک ویروسی به سلولهای هدف، ترانسدوکشن سلولی با موفقیت انجام شد بطوریکه ترانسژنهای گزارشگر در 100% سلولها مشاهده شد. متقابلا تست بخش رقیق سوپرناتان منجر به هیچگونه بیان ژن که نشانگر فعالیت ویروسی باشد نگردید. تولید تیتر بالای ویروسی با روش فیلتراسیون مزبور برای انتقال موفقیت آمیز ژنها اهمیت دارد و از نظر هزینه، حجم کار و زمانبری بر آنها ارجحیت دارد. در بخش دوم این مطالعه، توالی مربوط به فاکتور مهم GDNF را به سازه لنتی ویروسی پیوند زده و به همان روش بالا ویروسهای تیتر بالا تولید کردیم. با انتقال این ویروسها به آستروسیتهای انسانی توانستیم افزایش بیان ژن GDNF را در سطح mRNA بمیزان 3 برابر بدست آوریم. این نتایج نشان دادکه لنتی ویروسهای حامل GDNF را میتوان با روش جاری در تیتر بالا تولید کرده و برای مطالعات تمایزی و حفاظت نورونی مورد استفاده قرار داد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله لنتی ویروس، انتقال ژن، ستونهای پروتئینی، فاکتور نوروتروفیک،
عنوان انگلیسی Generation of High-titer Recombinant Lentiviruses Carrying Nurotrophic Factor GDNF Gene and Their Transfer to Human Astrocytes
چکیده انگلیسی مقاله Lentiviruses are considered one of the most effective recombinant viruses for gene transfer to mammalian cells and tissues. This study comprises of two essential parts: (1) evaluation of efficiency of protein purification columns in concentration of recombinant lentiviruses, and (2) production of recombinant lentiviruses carrying GDNF coding sequences. In part (1) we co-transfected human embryonic kidney cell line HEK-293T with three lentivirus vectors called transfer (carrying either GFP or Jred), packaging and envelope vectors. After a filtration step, we applied the supernatant from transfected cells to Amicon protein columns for concentration purposes. Centrifugation removed 99% of the supernatant and left behind 500-µl-volume of solution full of virions. We thereby produced a of virus stock. Various dilutions of this stock were added to HEK-293T cells that produced up to 100% infected cells positively expressing transgenes. To examine whether the removed supernatant (overflow) has any trace of infective virus by chance, we also used dilutions of the overflow for infection and observed no sign of eGFP or Jred expression. Given the need for a high-titer virus stock for successful target cell transduction, our results indicate that our filtration method of virus concentration is able to produce high virus titer and is cost-effective and less time consuming than previous methods. In part (2), due to the importance of neurotrophic factor GDNF in differentiation and neuroprotection as well as in therapy of neurodegenerative disorders, we ligated GDNF coding sequence into the lentivirus backbone in the second phase of our study. We applied the same method outlined above to produce high-titer recombinant viruses. Following infection of human astrocytoma cells with this virus stock, we detected 3-fold increase in GDNF mRNA expression using RT-PCR. Lentiviruses carrying GDNF can therefore be generated at high titer using the column method and applied for differentiation and neuroprotection studies.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله موسی گردانه |
اتوبان تهران-کرج- بلوار پژوهش- پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

نفیسه دهشکار گونه فراهانی | deheshkar farahani
دانشجو

نادر مقصودی |
عضو هیئت علمی

حسین عطار |
عضو هیئت علمی

عباس رحیمی شم آبادی | rahimi شم abadi
کارشناس

احسان قریب |
دانشجو

نشانی اینترنتی http://biot.modares.ac.ir/article_3309_cf4c478390768c62759afb67518b113f.pdf
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/899/article-899-501067.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات