این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
طب جنوب، جلد ۲۰، شماره ۳، صفحات ۲۴۵-۲۵۶
عنوان فارسی کلونینگ و بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سیستم یوکاریوتی
چکیده فارسی مقاله زمینه: هلیکوباکتر پیلوری شایع‌ترین باکتری است که جوامع انسانی را در ابعاد جهانی مبتلا به عفونت ساخته است. بیان فلاژل و تحرک باکتری در کلونیزاسیون و ویرولانس آن عامل بسیار مهمی است. ژن flaA یکی از ژن‌های کد کننده فلاژلین می‌باشد که نقش کلیدی در حرکت باکتری و کلونیزاسیون آن دارد و از نظر ایمنی بخشی نیز مورد توجه می‌باشد. هدف از این مطالعه طراحی، ساخت سازواره و بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول‌های یوکاریوتی است. موادوروش‌ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا از هلیکوباکتر پیلوری سویه استاندارد، DNA ژنومی تخلیص و ژن flaA با پرایمرهای اختصاصی به روش PCR تکثیر و جداسازی شد. سپس با بهره‌گیری از تکنیک همسانه سازی T/A در پلاسمید pTZ کلون گردید. به منظور بیان ژن flaA و ایجاد سازواره نهایی، ژن flaA از پلاسمید pTZ خارج شد و در وکتور بیانی (-)pcDNA3.1 ساب کلون گردید. سازواره -flaA(-)pcDNA3.1 به روش الکتروپوریشن به سلول جانوری CHO منتقل و بیان یوکاریوتی ژن flaA با تکنیک SDS-PAGE بررسی شد. یافته‌ها: نتایج نشان می‌دهد محصول PCR ژن flaA در وکتور pTZ کلون و در باکتری اشریشیا کلای سویه TOP10F تکثیر یافته است. همچنین هضم آنزیمی و تعیین توالی حاکی از تشکیل سازواره نهایی -flaA(-)pcDNA3.1 است. در نهایت بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول جانوری CHO، نشان داد سازواره ژنی حاصل قادر به بیان موفق محصول ژن flaA در سیستم یوکاریوتی می‌باشد. نتیجه‌گیری: با توجه به اینکه سازواره نهایی -flaA(-)pcDNA3.1 قادر به بیان محصول پروتئینی ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول‌های جانوری می‌باشد و پروتئین فلاژلین یکی از آنتی ژن‌های مهم این باکتری است. بنابراین به درستی می‌توان گفت که سازواره ژنی -flaA(-)pcDNA3.1 کاندیدای مناسبی برای استفاده در زمینه واکسن‌های ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری می‌باشد و در تحقیقات آینده می‌توان از آن برای بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی بهره گرفت.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله هلیکوباکتر پیلوری، ژن flaA، کلون‌سازی، الکتروپوریشن
عنوان انگلیسی Cloning and Study of Expression of Helicobacter Pylori FlaAGene in Eukaryotic System
چکیده انگلیسی مقاله Background: Helicobacter pylori is the most common bacterium causing chronic infections worldwide.Expression of flagella and bacterial motility are very important incolonization and virulence. FlaA geneis one of theflagellin-encoding genes that play the key role in the colonization and bacterial motility and it has a significant impact in immunization. The aim of this study wasto design, construction and the evaluation of the Helicobacter pylori flaA gene expression in eukaryotic cells. MaterialandMethods: In this experimental study, genomic DNA was purified from the Helicobacter pylori standard strain and flaA gene was amplified and isolated by PCR method with use of the specific primers. Then, this gene was cloned into pTZ vector by T/A cloning technique. In order to flaA gene expression and generation of final construct, the flaA gene was removed from pTZ plasmid and sub-cloned into the pcDNA3.1 (-) expression vector. The pcDNA3.1 (-)-flaA construct was transformed into CHO cells by electroporation, and flaA eukaryotic gene expression was studied on SDS-PAGE. Results: The results showed that flaA gene PCR product was cloned into pTZ vector and amplified in Escherichia coli TOP10F strain. Also the enzymatic digestion and sequencing showed that the pcDNA3.1 (-)-flaA was performed. Finally, the evaluation of the Helicobacter pyloriflaA gene expression in CHO cells showed that the generated gene construct can expressed the flaA product in eukaryotic system, successfully. Conclusion: Given that the pcDNA3.1 (-)-flaA as a final construct is able to express the flaA protein of the Helicobacterpylori in animal cells. Flagellin protein is one of the important antigens of the bacteriumSo we can properly say that gene pcDNA3.1(-)-flaA consteuct is an appropriate candidate for use in the field of gene vaccines against Helicobacter pylori and in future researches can be used to check the immunization in laboratory animals. 
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Helicobacter pylori, flaA gene, Cloning, Electroporation
نویسندگان مقاله محترم صادقی | motaram sadeghi
biotechnology research center, shahrekord branch, islamic azad university, shahrekord, iran
مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی شهرکرد (Islamic azad university of shahrekord)

عباس دوستی | abbas doosti
biotechnology research center, shahrekord branch, islamic azad university, shahrekord, iran
مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی شهرکرد (Islamic azad university of shahrekord)

نشانی اینترنتی http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-1&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله دریافت فایل مقاله
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده بیوشیمی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات