این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشکده پزشکی اصفهان، جلد ۱، شماره ۱، صفحات ۱۱۴۵-۱۱۵۰
عنوان فارسی بیان پروتئین فاکتور ۷ انعقادی عملکردی نوترکیب انسانی در سلول‌های پستاندار
چکیده فارسی مقاله مقدمه: فاکتور 7 انعقادی (Factor VII یا FVII) یک سرین پروتئاز وابسته به ویتامین K است که نقش محوری در شروع مسیر خارجی آبشار انعقادی دارد. مسیر خارجی آبشار انعقادی، مکانیسم اصلی تشکیل لخته در شرایط فیزیولوژیک بود. نقص مادرزادی فاکتور 7، بیماری خونریزی دهنده‌ی مغلوبی است که به علت جهش‌های ژن F7 ایجاد می‌شود. مصرف فاکتور 7 نوترکیب، به عنوان درمانی برای نقص فاکتور 7 و بیماری‌های هموفیلی می‌باشد. اولین قدم در تولید فاکتور 7 نوترکیب، کلون کردن ژن فاکتور 7 در وکتور بیانی مناسب و در سلول‌هایی است که بتوانند پردازش‌های کارآمدی را بر روی پروتئین بیان شده اعمال کنند. روش‌ها: Complementary DNA (cDNA) کامل ژن F7 انسان به کمک روش Real time-polymerase chain reaction (RT-PCR) از سلول‌های Liver hepatocellular cells ( HepG 2 ) به دست آمد و وارد وکتور بیانی pcDNA3.1/neo گردید. سازه‌ی به دست آمده، در سلول‌های Chinese hamster ovary (CHO-K 1 ) ترانسفکت گردید. پس از ترانسفکشن، به منظور بررسی بیان فاکتور 7، میزان آنتی‌ژن فاکتور 7 به کمک Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) و میزان فعالیت انعقادی به روش One stage PT based در محیط کشت سلول‌های ترانسفکت شده‌ی موقت اندازه‌گیری شد. یافته‌ها: مطالعه‌ی حاضر، نشان داد که فاکتور 7 با موفقیت در سلول‌های CHO-K 1 بیان شده و دارای فعالیت انعقادی است. نتیجه‌گیری: در این مطالعه، فاکتور 7 نوترکیب با فعالیت انعقادی تولید گردید که حاکی از آن است که وکتور بیانی pcDNA3.1/neo برای بیان این پروتئین در سلول‌های پستانداران مناسب است و علاوه بر این، سلول‌های CHO-K 1 پردازش‌های پس از ترجمه را به درستی بر روی فاکتور 7 انجام می‌دهند و می‌توانند برای تولید فاکتور 7 نوترکیب مورد استفاده قرار گیرند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله فاکتور 7 انعقادی، پروتئین نوترکیب، سلول‌های HepG2، کلون کردن،
عنوان انگلیسی Expression of Functional Recombinant Human Coagulation Factor VII Protein in Mammalian Cells
چکیده انگلیسی مقاله Background: Coagulation factor 7 (FVII) is a vitamin-k-dependent serine protease with an essential role in initiation of extrinsic pathway of coagulation cascade. Extrinsic pathway is the major mechanism of clot formation in physiologic conditions. Congenital deficiency of FVII is a recessively inherited bleeding disorder caused by F7 gene mutations. The use of recombinant FVII is a therapeutic intervention for treatment of FVII deficiency and hemophilia diseases. The first step of production of recombinant FVII is cloning of F7 gene in an appropriate expression vector and transfection of the vector into cells capable of efficient processing of the expressed protein. Methods: Complete human F7 cDNA was isolated from HepG2 cell using real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) method. The cDNA was inserted into pcDNA3.1/neo expression vector and CHO-K1 cells were transiently transfected with the resulting construct. After transfection, in order to study the expression of recombinant FVII, conditioned medium of the cells was collected and coagulant activity and antigen level of FVII was assessed using one-stage PT-based and the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) methods, respectively. Findings: The recombinant FVII was expressed in CHO-K1 cells successfully and had appropriate coagulant activity. Conclusion: In this study, we produced functional recombinant coagulation factor 7 with coagulant activity. This suggests that the pcDNA3.1/neo is a suitable vector for expression of FVII protein in mammalian cells and CHO-K 1 cells exert correct and efficient post-translational processes on FVII protein and can be used to produce recombinant FVII protein.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله امیر مشایخی |
دانشیار، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده ی علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

شیرین شهبازی |
استاد، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی (Shahid beheshti university of medical sciences)

میرداوود عمرانی |


نشانی اینترنتی http://jims.mui.ac.ir/index.php/jims/article/view/7914
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/103/article-103-544886.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده مقاله پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات