این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۲۰، شماره ۳، صفحات ۳۳-۴۸
عنوان فارسی بیان و تخلیص پروتئین کایمر نوترکیب دربردارنده CtxB و TcpA از ویبریوکلرا و بررسی تیتر آنتی‌بادی در موش
چکیده فارسی مقاله هدف: عامل کلونیزاسیون پیلی tcpAو توکسین کلرا مهم‌ترین عوامل بیماری‌زایی ویبریو کلرا هستند و توانایی تحریک سیستم ایمنی را دارند. هدف از این تحقیق بررسی بیوانفورماتیکی، بیان پروتئین کایمر نوترکیب CTXB-TCPA در باکتری اشریشیا کلی و تولید آنتی‌بادی علیه آن در موش بود. مواد و روش‌ها: کاست ژنی دربردارنده ژن‌های ctxB، tcpAو فاصله‌انداز با روش‌ بیوانفورماتیکی طراحی شد. شاخصه‌هایی از قبیل ساختار پروتئین کایمر و اپی توپ‌ها بررسی شد. برای ساخت کاست ژنی، ژن‌های ctxBو tcpAتکثیر و در ناقل pET28a همسانه‌سازی شدند. بیان ژن‌های ctxB-tcpAدر pET28a(+) تحت القای IPTG انجام شد. پروتئین نوترکیب CTXB-TCPA به روش SDS-PAGE و لکه‌گذاری وسترن تأیید شد. تیتر آنتی‌بادی تولید شده در سرم موش با روش الایزا بررسی شد. نتایج: شاخص انطباق‌پذیری در ژن بهینه‌سازی شده به 9/0 تغییر کرد. با بهینه‌‌سازی ژنی درصد کدون‌های با ترجیح بالا به 74 درصد افزایش یافت. تحلیل آنزیمی همسانه‌سازی کایمر ژنی ctxB-tcpA در ناقل بیانی pET28a(+) را تأیید کرد. پروتئینی با وزن مولکولی 35 کیلو دالتون در SDS-PAGE دیده شد. واکنش پروتئین با آنتی‌بادی ضد سم کلرا در وسترن بلات تأیید شد. میزان پروتئین خالص شده 1/33 میلی‌گرم در لیتر بود. ایمن‌سازی موش‌ها پاسخ آنتی‌بادی سرمی را القا کرد. نتیجه‌گیری:پروتئین کایمر می‌تواند برای بررسی‌های ایمنی علیه وبا در نظر گرفته شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Expression and purification of recombinant chimeric protein contains CtxB and TcpA from Vibrio cholera and investigation of antibody titer in mouse
چکیده انگلیسی مقاله Objective: The TcpA colonization factor of pili A and the cholera toxin are the most important pathogenesis factors of Vibrio cholera that have the ability to stimulate the immune system. The aim of this study is a bioinformatics analysis of the expression of CtxB-TcpA recombinant chimeric protein in E. coli, and production of antibody against it in mice. Methods: We designed a gene cassette that contained the CtxB and TcpA genes, and a spacer linker by using bioinformatics. Characteristics that include the structure of the chimer protein and epitopes were studied. In order to build a gene cassette, TcpA and CtxB genes were proliferated and cloned in pET28a(+). CtxB-TcpA gene expression was induced by IPTG. The produced CtxB-TcpA recombinant protein was confirmed by SDS-PAGE and Western blot analyses. Antibody produced from mice serum was isolated and confirmed by ELISA. Results: The codon adaptation index of the optimized gene was 0.9. The prevalence ratio codons increased to 74% through codon optimization. Enzyme analysis verified the chimeric gene CtxB-TcpA cloning in the pET28a (+) expression vector. A protein with a molecular weight of 35 kDa was seen on SDS-PAGE. Its reaction with anti-histidine antibodies was confirmed by Western blot. The purified protein was 33.100 mg/l. Immunization of mice induced a serum antibody response. Conclusion: The chimeric protein can be considered a good candidate for effective immunity against cholera.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله میلاد عامریان |
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

شهرام نظریان |
مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین ع ، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (Imam hosseyn university)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_17640_956c805bf00ea8f44af8cc738251f657.pdf
فایل مقاله دریافت فایل مقاله
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات