این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۰، شماره بهار ۸۶-، صفحات ۹-۱۶
عنوان فارسی طراحی و استفاده از روش Visual DNA Chip برای تشخیص عفونت ویروس نقص ایمنی اکتسابی (HIV-۱)
چکیده فارسی مقاله هدف: ویروس نقص ایمنی اکتسابی نوع یک (HIV-1)، عامل ایجاد کننده نشانگان نقص ایمنی اکتسابی انسانی (AIDS) می‌باشد و تشخیص ژن ویروس HIV-1 در نمونه‌های مشکوک مدرکی جهت تشخیص عفونت است. انتقال بیماری از طریق انتقال خون در دوره پنجره در مراکز انتقال خون، یک معضل جهانی محسوب می‌شود. علاوه بر این، نیاز مبرمی برای تشخیص سریع، حساس و دقیق عفونت HIV-1 قبل از ظهور پادتن در بدن فرد آلوده در بیمارستان ها، مراکز بهداشتی و در نوزادان متولد شده از مادران آلوده وجود دارد. مواد و روش ها: روش سریع و حـساس تراشه ویـژوال DNAبا کمک RT-Nested PCR و روش و سیستم نشانگر آنزیم- سوبسترا بکار گرفته شد. در ابتدا پس از طراحی و راه اندازی روش RT-Nested PCR و اطمینان از به‌دست آمدن محصول مورد نظر، با استفاده از dNTP نشان‌دار شده و با ماده دیگوکسی ژنین، روش یاد شده طراحی گردید. محصول به‌دست آمده بر روی تراشه، که از قبل مراحل آماده سازی آن انجام شده و کاوشگر به آن متصل گردیده بود، تحت شرایط هیبریداسیون قرار گرفت. پس از شستشوی تراشه، با آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین که با آنزیم آلکالین فسفاتاز، کونژوگه شده بود نزدیک کرده و پس از شستشو، در حضور سوبسترای BCIP/NBT واکنش انجام گرفت. تولید رنگ ارغوانی، نشانه بر مثبت بودن آزمایش و حضور ژن ویروسی در آن نمونه می‌باشد و عدم تغییر رنگ مبنی بر منفی بودن آزمایش است. نتایج: 35 نمونه سرمی از مراحل مختلف عفونت (ایدز، علامت دار و بدون علامت) و 20 نمونه سرمی تأیید شده منفی، جمع‌آوری شد و با روش یاد شده مورد بررسی قرار گرفت. در تمام موارد مثبت رنگ ارغوانی مشاهده گردید، ضمن اینکه در هیچ کدام از موارد منفی رنگی مشاهده نشد. نتیجه‌گیری: در این پژوهش، مشاهده گردید روش طراحی شده، دارای حساسیت و اختصاصیت بالایی برای تشخیص عفونت ویروس HIV-1 می‌باشد. به نظر می‌رسد که ژن ویروسی را می‌توان حتی قبل از تغییرات سرمی و ظهور پادتن تشخیص داد و از این رو می‌توان دوره پنجره‌ای عفونت را کوتاه‌تر کرد. علاوه بر آن در نوزادان متولد شده از مادران آلوده به دلیل انتقال مادری پادتن‌ها روش های تشخیص پادتن و سرولوژی فاقد ارزش است و بنابراین از این شیوه می‌توان استفاده نمود. همچنین در این روش به دلیل حساسیت بالا، نمونه‌های سرمی مثبت با بار ویروسی خیلی پایین هم قابل تشخیص است.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Development of Visual DNA Chip to Detect Human Immunodeficiency Virus type 1 Infection
چکیده انگلیسی مقاله Objectives: Human Immunodeficiency Virus type 1 is the causative agent of Acquired Immunodeficiency syndrome “AIDS” in human and demonstration of HIV-1 genome in samples is accepted as evidence of infection. Transmission of Infection during window period in blood transfusion settings is a world wide concern. Also there is a need for a rapid, sensitive and accurate technique to detect HIV-1 infection prior to antibody appearance in patients and new borns. Material and Method: A rapid Visual DNA Chip based on RT-Nested PCR and Enzyme-Substrate detection system was developed. At first a specific RT-Nested PCR was developed and the products were confirmed in gel electrophoresis and the products were labeled with DIG (Digoxigenin). The labeled products were then hybridized with the pre-prepared chip with an anchored specific probe. After the washing procedure an antibody against DIG conjugated with alkaline phosphates enzyme was used. After the second washing procedure the BCIP/NBT substrate was used and development of color was interpreted as positive while the negative samples developed no color. Results: 35 sera samples from different stages of HIV infection (AIDS, Asymptomatic and Symptomatic Infection) as well as 20 confirmed negative sera samples were collected and checked with the developed assay. All the positive samples developed reaction while the negative samples had no reaction. Conclusion: In the current study the developed assay showed high sensitivity and specificity to detect HIV-1 infection. It seems that the viral genome could be detected prior to antibody appearance and hence the window period could be shortened. Also the assay could be used to detect infection in new borns from infected mothers, because the maternal antibody could pass the placenta and antibody based assay have false positive results. Because of the high sensitivity, the developed assay could also detect infection in very low viral load conditions.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله HIV,RT-Nested PCR,.Visual DNA Chip,Visual DNA Chip
نویسندگان مقاله جواد دوزنده | Javad Douzande
Department of Virology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه ویروس شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

مهرداد روانشاد | Mehrdad Ravanshad
Department of Virology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه ویروس شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

منوچهر رسولی | Manochehr Rasouli
Department of Immunology Research Center of Clinical Microbiology of Ostad Alborzi, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran
گروه ایمنی شناسی، مرکز تحقیقات بالینی میکروب شناسی استاد البرزی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران

فرزانه صباحی | Farzaneh Sabahi
Department of Virology, School of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه ویروس شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

عبدالوهاب البرزی | Abdolvahab Alborzi
Research Center of Clinical Microbiology of Ostad Alborzi, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran
مرکز تحقیقات بالینی میکروب شناسی استاد البرزی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران

نشانی اینترنتی http://journals.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-30-1000-1216&slc_lang=fa&sid=30
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/159/article-159-590256.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات