این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۰، شماره پاییز و زمستان۸۶-، صفحات ۰-۰
عنوان فارسی انتقال سازه ژنی حاوی بتاگلوبین و miniLCR به رده‌های سلولی COS-۷ و K۵۶۲ توسط لنتی‌ویروس نوترکیب: مقدمه‌ای برای ژن‌درمانی بیماران بتا‌-تالاسمی ماژور
چکیده فارسی مقاله هدف: بیماری بتا-تالاسمی در اثر غیاب یا کاهش سنتز زنجیره بتاگلوبین به وجود می‌آید. یکی از روش‌های درمانی مؤثر برای این بیماری ژن‌درمانی توسط ناقل‌های ویروسی است. ظرفیت ناقل‌های لنتی‌ویروسی حدود 8 کیلوباز است. با توجه به ظرفیت محدود ناقل‌های لنتی‌ویروسی از miniLCR طراحی شده به طول 6 کیلوباز به جای ناحیه تنظیمی LCR در کنار ژن بتاگلوبین استفاده شد. هدف از این مطالعه ساخت لنتی‌ویروس‌های نوترکیب حاوی ژن بتاگلوبین و miniLCR برای انتقال سازه ژنی مورد نظر به سلول‌های هدف به منظور ژن‌درمانی بتا-تالاسمی ماژور است. مواد و روش‌ها: هر یک از قطعات HS2، HS3، HS4 (miniLCR) و ژن بتاگلوبین به همراه نواحی UTR΄5 و΄3 از DNA ژنومی افراد سالم با روش PCR تکثیر شد. هر یک از آن‌ها پس از کلونینگ در ناقل pTZ57R/T و ساب‌کلونینگ در ناقل pBGGT در نهایت در یک ناقل لنتی‌ویروسی به‌نام pLenti-Dest ساب‌کلون شد. طی ترانسفکشن همزمان ناقل نهایی به همراه سه ناقل کمکی (Plp/VSVG، Plp2، Plp1) با لیپوفکتامین 2000 به درون رده سلولی 293T، لنتی‌ویروس‌های نوترکیب حاوی سازه ژنی مورد نظر تولید و با RT-PCR تأیید شدند. نتایج: تیتر این لنتی‌ویروس‌های نوترکیب در رده‌های سلولی COS-7و K562 یکسان بود. MOI بهینه این ویروس‌ها برای سلول COS-7، 5 به‌دست آمد. ترانسداکشن سلول‌های هدف در حضور پلی‌برن 2 برابر شد. سلول‌های COS-7 ترانسدیوس شده پس از دو هفته انتخاب آنتی‌بیوتیکی باقی ماندند. DNA این کلونی‌های باقی مانده استخراج و با روش PCR وارد شدن سازه ژنی ساخته شده تأیید شد. نتیجه‌گیری: لنتی‌ویروس‌ها می‌توانند وسیله‌ای مناسب برای انتقال سازه ژنی فوق به سلول‌های هدف در حال تقسیم و آن‌هایی که تقسیم نمی‌شود مانند سلول‌های بنیادی با هدف ژن‌درمانی بیماری‌های خونی مانند بتا-تالاسمی باشند. کارایی استفاده ازلنتی‌ویروس‌ها بیشتر از روش هدف‌گیری ژنی در ژن‌درمانی بتا-تالاسمی است. انتظار می‌رود با استفاده از واحدهای HS2و HS3 و HS4 در mini LCR به جای LCR در کنار ژن بتاگلوبین و نیز انتخاب قطعه HS3 با طول بزرگتر میزان بیان بتاگلوبین را افزایش دهد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله بتا-تالاسمی،ژن بتاگلوبین،لنتی‌ویروس،ژن‌درمانی
عنوان انگلیسی Transduction of COS-7 and K562 cell lines by recombinant lentiviral particles carrying miniLCR and β-globin gene: Introduction to gene therapy of major β-thalassemia
چکیده انگلیسی مقاله Objective: β-thalassemia is caused by absence or reduction of β-globin chain synthesis. One of the effective therapeutic methods for this disease can be gene therapy by viral vectors. The capacity of lentiviral vectors is approximately 8 kb, we designed a 6 kb construct containing mini LCR and β-globin gene instead of LCR region. The aim of this study is to make a recombinant lentiviruses containing miniLCR and β-globin gene for transfer to the target cells for gene therapy of β-thalassemia. Materials and Methods: HS2, HS3, HS4 segments (mini LCR) and β-globin gene with 5΄ and 3΄ UTR were amplified from the genomic DNA of a normal individual by PCR. Each segment was cloned in pTZ57R/T vector and then sub cloned first into the pBGGT vector and finally into the pLenti-Dest vector. Final transfer vector and the three helper packaging plasmids (Plp1, Plp2, Plp/VSVG) were cotransfected into 293T packaging cells using lipofectamine 2000. Harvested viruses were confirmed by RT-PCR on extracted RNA of these recombinant lentiviruses. Results: The titer of lentiviral stock determined in a K562 cell line and compared with COS-7 cell line. The titer in both cell lines was the same. Optimum MOI for COS-7 cell line was 5 and when polybrene was used transduction increased by 2 fold. The remaining transduced COS-7 colonies were expanded and DNA was extracted. By PCR, random integration of construct into the genome was evaluated. Conclusion: The produced lentiviruses can be an appropriate means for effective transfer of the designed construct into dividing and non-dividing cells such as hematopoetic stem cells for transplantation of beta thalassemia patients. Efficiency of transduction by leniviruses is more than the gene targeting technique. Also units of HS2, HS3 and HS4 regions in mini LCR and selection of larger HS3 unit may increase the expression of beta globin gene.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله miniLCR,β-thalassemia,β-globin gene
نویسندگان مقاله مریم بی‌خوف‌تربتی | Maryam Bikhof Torbati
Department of Biology, Islamic Azad University-Science and Research Campus, Tehran, Iran
گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات، تهران، ایران

حسین خان‌احمد | Hossein Khanahmad
Department of BCG, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran
گروه ب‌ث‌ژ، انستیتو پاستور ایران، کرج، ایران

فاطمه جمشیدی | Fatemeh Jamshidi
Department of Molecular Medicine, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
گروه پزشکی مولکولی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران

مرتضی کریمی‌پور | Morteza Karimipour
Department of Molecular Medicine, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
گروه پزشکی مولکولی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران

مجید صادقی‌زاده | Majid Sadeghizadeh
Department of Genetics, School of Basic Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه ژنتیک، دانشکده علوم پایه، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

محمدعلی شکرگذار | Mohammad Ali Shokrgozar
Department of Cell Bank, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
بخش بانک سلولی ایران، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران

امیر امان‌زاده | Amir Amanzadeh
Department of Cell Bank, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
بانک سلولی ایران، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران

سیروس زینلی | Sirus Zeinali
Department of Molecular Medicine, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
گروه پزشکی مولکولی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران

نشانی اینترنتی http://journals.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-30-1000-8127&slc_lang=fa&sid=30
فایل مقاله اشکال در دسترسی به فایل - ./files/site1/rds_journals/159/article-159-590269.pdf
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات