این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
Physiology and Pharmacology، جلد ۱۴، شماره ۱، صفحات ۵۶-۶۵
عنوان فارسی طراحی، کلون، بیان و ارزیابی جایگزین های سیستئینی مولکول استرپتوکیناز در اندازه های کامل و کوتاه شده
چکیده فارسی مقاله مقدمه: ترومبوز یا انسداد عروق خونی توسط لخته، می تواند منجر به سکته قلبی و گاهی اوقات مرگ شود. صرفنظر از رفع انسداد به کمک جراحی، تنها درمان موجود تجویز عوامل ترومبولیتیک بمنظور از بین بردن لخته است. استرپتوکیناز رایجترین داروی فیبرینولیتیک برای این منظور است، اما با این وجود تجویز آن با مشکلاتی از جمله تحریک سیستم ایمنی، نیمه عمر کوتاه دارو و خونریزی همراه می باشد. پگیلاسیون پروتئینهای داروئی با واسطه اسید آمینه سیستئین یک روش نوین کاستن از ایمنی زائی دارو و همچنین افزایش پایداری و نیمه عمر آنها است. هدف نهائی این مطالعه طراحی و ساخت جایگزینهای سیستئینی استرپتوکیناز کامل و نیز اشکال کوتاه شده آن، که با داشتن اختصاصیت به فیبرین اثرات هموراژیک کمتری دارند، می باشد. مواد و روشها: با استفاده از تکنیک موتاسیون زائی در ناحیه دلخواه به کمک PCR موتانتهای ژنهای استرپتوکیناز، دارای جایگزینی کدون AGC (سرین) با TGC (سیستئین)، که پروتئینهای با طول کامل (اسیدهای آمینه 414-1) و کوتاه شده (اسیدهای آمینه 386-60 و 386-143) را کد می کردند ساخته شده و در پلاسمید pET41a کلون شدند. بدنبال القاء باکتری های ترانسفورم شده E. coli استرپتوکیناز های نوترکیب بیان شدند و پروتئینهای حاصل با انجام وسترن بلات تائید شده، به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی تخلیص شده و در نهایت از نظر فعالیت بیولوژیک مورد ارزیابی قرار گرفتند. یافته ها: بیان ژنهای استرپتوکیناز موتانت بخوبی صورت گرفته و پروتئین های نوترکیب با اندازه های کامل و کوتاه شده بواسطه اتصال به برچسب هیستیدینی ناشی از ناقل ژنی به راحتی تخلیص شدند. همچنین علیرغم جایگزینی سرین با سیستئین در جایگاه اسیدآمینه ای 208، پروتئینهای نوترکیب جدید همچنان فعالیت بیولوژیک خود را حفظ کردند. نتیجه گیری: پروتئینهای موتانت تولید شده در این مطالعه امکان انجام فرآیند پگیلاسیون اختصاصی بر روی سیستئین و به این ترتیب ارتقاء فعالیت بالینی پروتئین استرپتوکیناز را فراهم می آورند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله استرپتوکیناز، پگیلاسیون، موتاسیون زائی، جایگزین سیستئینی
عنوان انگلیسی Design, cloning, expression and evaluation of cysteine-substitutes of intact and truncated molecules of streptokinase
چکیده انگلیسی مقاله Introduction: Thrombosis and the blockage of blood vessels with clots, can lead to acute myocardial infarction and some times even death. Aside from surgical interventions to remove the blockage, the only available treatment is the administration of thrombolytic agents to dissolve the blood clot. Streptokinase (SK) is the most commonly used fibrinolytic drug for this purpose. However, SK has some disadvantages including immunogenicity, short half-life and hemorrhage induction. PEGylation of pharmaceutical proteins by the incorporation of cysteine amino acid is a novel method to decrease their immunogenicity and also to increase their stability and half-life. The ultimate goal of this study was designing and construction of the cysteine analogues of full-length and truncated forms of SK, which posses less hemorrhagic side effects due to fibrin specificity. Methods: By application of PCR-based site-directed mutagenesis technique, mutants of SK genes, harboring the transversion of AGC codon (serine) to TGC (cysteine), which encoded full-length (amino acids 1-414) and truncated (amino acids 60-386 and 143-386) proteins were established and cloned in pET41a plasmid. Expression of the recombinant SKs was achieved through the induction of E. coli transformants. Produced proteins were confirmed by western blotting, purified by affinity chromotography and finally evaluated for their biological activity. Results: Mutant SK genes were efficiently expressed and due to the fusion of vector-derived His-tag the recombinant full-length and truncated proteins were easily purified. Also despite the replacement of serine to cysteine in the position of 208, the biological activity of the new recombinant protein was still maintained. Conclusion: The produced mutants of this study provide the possibility of establishing the cysteine specific PEGylation process and improvement of clinical activity of streptokinase protein.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله نسترن منزوی | nastaran monzavi
hepatisis amp;amp; aids institute tehran.iran


محمدرضا آقاصادقی | mohamad reza aghasadeghi
hepatisis amp;amp; aids institute tehran.iran


رضا عربی | reza arabi
hepatisis amp;amp; aids institute tehran.iran


آرش معمارنژادیان | arash memarnejadian
hepatisis amp;amp; aids institute tehran.iran


مهدی سادات | mehdi sadat
hepatisis amp;amp; aids institute tehran.iran


حسین خان احمد | hossein khanahmad
hepatisis amp;amp; aids institute tehran.iran


melania ابراهیمی | melania ebrahimi
hepatisis amp;amp; aids institute tehran.iran


فرزین روحوند | farzin roohvand
hepatisis amp;amp; aids institute tehran.iran
نشانی اینترنتی http://www.phypha.ir/ppj/browse.php?a_code=A-10-366-1&slc_lang=en&sid=en
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده Cellular and Molecular BioMedicine
نوع مقاله منتشر شده Original Research
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات