این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران، جلد ۱۸، شماره ۶۴، صفحات ۷۱-۸۰
عنوان فارسی پرفیوژن و جداسازی هپاتوسیت از کبد رات
چکیده فارسی مقاله سابقه و هدف: پرفیوژن کبد برای مطالعه متابولیسم ویژه در این ارگان و نیز تهیه هپاتوسیت به کار می رود. برای تهیه هپاتوسیت از کبد رات به طور کلی سه روش مکانیکی، شیمیایی و آنزیمی وجود دارد. هر سه روش دارای مزایا و معایب خاص می باشند. به نظر می رسد تلفیقی از هر سه روش منجر به آسیب کمتر غشا سلول و بازده بیش تر عمل می شود.مواد و روش ها: در این مطالعه کبد در محل خود (in situe) کانوله می شود و بر اساس روش شیمیایی - آنزیمی در سه مرحله پرفیوز می گردد. در اولین مرحله کبد توسط مسیر تک مسیری باز توسط محلول کربس - رینگر فاقد کلسیم و منیزیم و حاوی شلاتور کلسیم (EDTA) به مدت ده دقیقه پرفیوز گردید. در دومین مرحله کبد توسط محلول کربس - رینگر فاقد کلسیم، منیزیم و شلاتور کلسیم برای شستشوی عروق کبد از شلاتور به مدت یک دقیقه دیگر پرفیوز می گردد. در سومین مرحله کبد توسط کربس - رینگر آنزیم کلاژناز (IU/mL 200) به مدت نه دقیقه توسط سیستم دو مسیری بسته پرفیوز گردید. سلول های هپاتوسیت در غلظت 7-9×106 cell/mL در محیط کربس - رینگر (بافر بیکربنات) در فلاسک های شیشه ای مخصوص تحت جو (O2:CO2, 95:5) انکوبه شدند. برای بررسی زنده بودن سلول های هپاتوسیت از تست های منع ورود رنگ (تریپان بلو) و از تست تراوش آنزیم سیتوزولی لاکتات دهیدروژناز (LDH) استفاده گردید.یافته ها: سنجش فعالیت آنزیم لاکتات دهیدروژناز (LDH) به عنوان نشانگر مهم بخش سیتوزولی در سلول هپاتوسیت و محیط انکوباسیون در آغاز و پایان انکوباسیون نشان داد که در ابتدای انکوباسیون حدود 92 درصد و در پایان انکوباسیون حدود 88 درصد آنزیم در سلول احتباس شده و به ترتیب فقط 8 درصد و 12 درصد آنزیم از سلول ها به خارج تراوش شده است. بررسی میکروسکوپی سلول های هپاتوسیت نیز نشان دادند که سلول ها دارای غشا صاف، بدون چروکیدگی و پار گی و بدون واکوئل می باشند. هنگام رنگ آمیزی سلول ها با رنگ حیاتی تریپان بلو فقط در 5 درصد سلول ها رنگ وارد سلول ها گردید.استنتاج: یافته های این تحقیق نشان می دهند که تلفیق روش های مکانیکی، شیمیایی و آنزیمی موجب بهبود کیفیت جداسازی سلول های هپاتوسیت از کبد رات می گردد. به طوری که پرفیوژن کبد توسط شلاتور کلسیم به مدت 10 دقیقه و سپس توسط آنزیم کلاژناز به مدت 9 دقیقه موجب تولید حدود 10 mL سلول با زنده بودن(Viability) بیش از 90 درصد می گردد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله پرفیوژن، هپاتوسیت، کبد، رات، شلاتور کلسیم و کلاژناز
عنوان انگلیسی Rat liver perfusion and hepatocytes isolation
چکیده انگلیسی مقاله Background and Purpose: Perfused rat liver and isolated hepatocytes are useful to study specific metabolism of this organ. Traditionally, mechanical, chemical and enzymatic methods have been used to isolate hepatocytes, and it appears that a mixed method is the preferred choice. Materials and Methods: The rat liver perfused in situe in three subsequent steps, 10 minutes with Krebs-Ringer solution containing ethylene diamine tetra-acetic acid (EDTA, 2mM) without calcium and magnesium, and 1 minute with the same solution, however, without EDTA in open non-recirculatory pathway. This followed by 10 minutes with Krebs-Ringer solution, containing collagenase (200 IU/mL) in closed recirculatory system. The hepatocytes were isolated, collected and incubated (6-8 × 106 cells/mL) for 3-hours in Krebs-Ringer solution, under the atmosphere of O2:CO2 (95:5). The cell viability was assessed with tripan blue exclusion and lactate dehydrogenase (LDH) leakage. Results: Assay of LDH activity, the marker of cytosolic enzyme, show that more than 92% and 88% of the enzyme had been retained in the cells, with less than 8% and 12% leakage from the damaged cells in the beginning and end of incubation, respectively. Microscopic evaluation showed that the majority of the cells had intact plasma membrane without vacuoles. When the cells were stained with dye, less than 5% of vital dye included these cells. Conclusion: The results showed that perfusion of the rat liver with the solution containing calcium chealator and collagenase can yield about 10 mL of hepatocytes with a viability of more than 90%.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله مهدی رسولی | m rasouli
faculty of medicine, mazandaran university of medical sciences, sari, iran
دانشیار گروه بیوشیمی بالینی، دانشکده پزشکی ساری، مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی مازندران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی مازندران (Mazandaran university of medical sciences)

حمیدرضا عسگری | h r asgari


نشانی اینترنتی http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-470&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی-کامل
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات