این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۲۱، شماره ۱، صفحات ۷-۱۳
عنوان فارسی همسانه‌سازی، بیان و خالص‌سازی اورات‌اکسیداز نوترکیب با استفاده از توالی اینتئین و پروتئین شبه الاستین
چکیده فارسی مقاله اهداف: بیان و خالص‌سازی اورات‌اکسیداز نوترکیب همانند سایر پروتئین‌های دارویی مستلزم صرف هزینه‌های زیادی است. استفاده از روش‌های غیرکروماتوگرافی در فرآیند خالص‌سازی می‌تواند سبب کاهش هزینه‌های تولید شود. بنابراین، هدف پژوهش حاضر، همسانه‌سازی، بیان و خالص‌سازی اورات‌اکسیداز نوترکیب با استفاده از توالی اینتئین و پروتئین شبه‌الاستین بود. مواد و روش‌ها: در پژوهش تجربی حاضر، ژن صناعی اورات‌اکسیداز در پایین‌دست توالی اینتئین و پروتئین شبه‌الاستین در پلاسمید بیانی قرار داده شد. بعد از کشت باکتری حاوی پلاسمید بیان‌کننده اورات‌اکسیداز، سلول‌ها لیز و محتوی پروتئین محلول از غیرمحلول به‌وسیله سانتریفوژ جدا شد. با افزودن نمک به بخش محلول حاوی اورات‌اکسیداز و در دمای Cº37، آنزیم مورد نظر رسوب داده شد. با انحلال رسوب در بافر خاص برش و به‌واسطه حضور توالی اینتئین، اورات‌اکسیداز تولیدشده از پروتئین شبه‌الاستین جدا شد. با افزودن مجدد نمک در دمای Cº37 پروتئین شبه‌الاستین رسوب و اورات‌اکسیداز در محلول باقی ماند. پس از بیان و خالص‌سازی اورات اکسیداز، میزان خلوص و فعالیت زیستی آن مورد ارزیابی قرار گرفت و با داروی استاندارد مقایسه شد. یافته‌ها: آنزیم اورات‌اکسیداز نوترکیب به‌صورت فیوژن با توالی کدکننده اینتئین و پروتئین شبه‌الاستین بیان و خالص شد. میزان خلوص 90% در این روش حاصل شد که معادل 89/1میلی‌گرم در میلی‌لیتر پروتئین بود. میزان مذکور معادل 64/1میلی‌گرم براساس فعالیت آنزیمی بود. نتیجه‌گیری: استفاده از توالی اینتئین و پروتئین شبه‌الاستین به‌صورت همراه با آنزیم اورات‌اکسیداز به بیان و خالص‌سازی این آنزیم بدون نیاز به روش کرماتوگرافی کمک می‌کند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله اورات‌اکسیداز، خالص‌سازی، اینتئین، الاستین
عنوان انگلیسی Cloning, Expression, and Purification of Recombinant Urate Oxidase Using Intein Sequence and Elastin-like Protein
چکیده انگلیسی مقاله Aims: Expression and purification of recombinant Urate oxidase as well as other pharmaceutical proteins are a costly process. The use of non-chromatographic methods in the purification process can reduce production costs. So, the aim of this study was cloning, expression, and purification of recombinant urate oxidase, using intein sequence and elastin-like protein (ELP). Materials and Methods: In the present experimental research, the synthetic urate oxidase gene was cloned in downstream of ELP–Intein in an expression plasmid. After cultivating bacteria containing urate oxidase expression plasmid, the soluble fraction of cell lysate was separated from insoluble portion, using centrifugation. The recombinant urate oxidase was precipitated by adding salt and incubation at 37°C. The resulting precipitant was resuspended in cleavage buffer and the urate oxidase was separated from ELP through Intein moiety. Adding salt for the second time and incubation at 37°C resulted in separation of urate oxidase from fusion partner. After expressing and purifying the urate oxidase, purity and biological activity of recombinant urate oxidase were compared to standard drug. Findings: The recombinant urate oxidase was expressed and purified using ELP and Intein tags as fusions partners. The rescombinant enzyme showed a purity of %90 equal to 1.89 mg.ml-1 based on protein concentration and 1.64 mg.ml-1 based on activity.  Conclusion: Using Intein sequence and Elastin-like protein, together with the Urate Oxidase enzyme helps to express and purify the enzyme without need for a chromatographic method.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Urate Oxidase, Purification, Intein, Elastin
نویسندگان مقاله
نشانی اینترنتی http://journals.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A--39633-337&slc_lang=other&sid=30
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده other
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات