این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
ارمغان دانش، جلد ۲۱، شماره ۴، صفحات ۳۷۲-۳۸۱
عنوان فارسی طراحی روش بررسی اتصال سلولی پروتئین‌ها بر پایه الایزا قابل استفاده در ژن‌درمانی برون ت
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: یکی از راهکارهای بهبود ژن درمانی، هدفمند کردن ژن، درمانگر می­باشد. افزودن توالی­های کد کننده پپتیدها و یا پروتئین­های با گرایش بالا به سلول­های هدف ژن­ درمانگر کد کننده پروتئین ترشحی، از جمله این روش­ها محسوب می­شود. با این وجود ارزیابی کارآمدی چنین تغییراتی در هدفمندسازی محصول ژن با روش­های معمول بررسی اتصال سلولی پروتئین­های درمانگر تولید شده در سیستم پروکاریوتی، به طور مستقیم امکان‌پذیر نیست. هدف از این مطالعه طراحی روشی بر مبنای آزمون الیزا برای بررسی اتصال سلولی پروتئین­­­های حاصل از ژن درمانی بود. مواد و روش­ها: به منظور هدفمندسازی ژن درمان‌گر Mda-7، با روش مهندسی ژنتیک، توالی کد کننده پپتید RGD4C، که گرایش زیادی به اینتگرین­های سطحی سلول­های سرطانی دارد، را درست بعد از توالی پپتید نشانه مصنوعی و در ناحیه کد کننده انتهای آمین پروتئین تعبیه کردیم. سپس این cDNA تغییر یافته و cDNA بدون تغییر در ناقل بیانی یوکاریوتی pCDNA3.1 همسان­سازی شد. ناقل­ها در رده سلولی HEK-293 ترانسفکت شدند. سپس میزان بیان Mda-7 ترشح شده در محیط کشت سلول­ها با آزمون الیزا سنجیده شد. پس از همسان­ کردن غلظت پروتئینMda-7 و RGD.Mda-7 در محیط­های کشت سلول­های ترانسفکت شده، از آنها به عنوان منبع این پروتئین­ها استفاده شد. کاهش غلظت محصول این ژن­ها دو ساعت پس از مجاورت با رده­های سلولی داری اینتگرین­ HepG2، M21 و فاقد اینتگرین Saos-2 با روش الیزا بررسی و مقایسه شد. این آزمایش سه مرتبه به طور مستقل انجام گرفت. داده‌ها با استفاده از آزمون آماری تی تست تجزیه و تحلیل شد. یافته‌ها: بررسی آماری نتایج، حاکی از این بود که محصول ژن RGD.Mda-7 نسبت به محصول ژن Mda-7 جهت اتصال به سلول‌های دارای اینتگرین HepG2 و M21 به طور معنی­داری گرایش بیشتری دارد، در حالی که جهت اتصال به رده سلولی فاقد اینتگرین Saos-2 تفاوت معنی‌داری نداشتند. بحث: به نظر می­رسد روش طراحی شده در این تحقیق، راه­کار مناسبی جهت ارزیابی اتصال سلولی پروتئین­ها در کاربردهای ژن درمانی باشد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله سنجش اتصال سلولی، الیزا، RGD.Mda-7 ، RGD
عنوان انگلیسی Design Methods of Cell Adhesion Proteins Based on ELISA Usable in-vitro in Gene Therapy
چکیده انگلیسی مقاله Background & aim: One of the strategies to improve the therapeutic gene is targeting gene therapy. A method which can be considered, is adding code sequences peptide or protein with high tendency to target cells and secreting the therapeutic gene encodes a protein. However, evaluating the effectiveness of such changes in the targeted cell binding protein gene product with the usual therapeutic methods produced in prokaryotic system is directly impossible. The purpose of this study was to evaluate the design methods of cell adhesion proteins based on ELISA usable in-vitro in gene therapy. Methods: In order to target the therapeutic gene Mda-7 by using genetic engineering, peptide coding sequence RGD4C with the tendency to cancerous cell surface integrin were inserted shortly after the artificial signal peptide sequence and the N-terminal coding region of the protein. Then, the modified and unmodified cDNA eukaryotic expression vector pCDNA3.1 were matched. Vectors were transfected in HEK-293 cell line. Then Mda-7 secreted expression levels were measured in cell culture by ELISA. After adjusting the protein concentration of Mda-7 and RGD.Mda-7, in cells transfected media, they were used as a source of protein. Reduce the concentration of these genes was assessed two hours after exposure to the integrin cell lines with HepG2, M21 and lacking integrin Saos-2 were also determined by ELISA. The present study was conducted three times independently. Data were analyzed using t-test. Results: Statistical analysis of the results suggested that the gene product of the gene product RGD.Mda-7 and Mda-7 to connect to HepG2 cells and M21 were more likely to have integrin. While binding to the cell lines of Saos-2, no significant difference were observed. Conclusions: It seems the present ELISA based method was a suitable strategy for cell attachment assay in gene therapy research.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Cell adhesion assays, ELISA, RGD.Mda-7 , RGD
نویسندگان مقاله ابراهیم حسینی | e hosseini
department of molecular genetics, tarbiat modares university, tehran, iran,
گروه ژنتیک مولکولی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران،
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

سیدیونس حسینی | sy hosseini
department of bacteriology and virology, shiraz university of medical sciences, shiraz, iran
گروه ویروس شناسی و باکتری شناسی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شیراز (Shiraz university of medical sciences)

طیبه هاشم پور | t hashempour
department of medical virology, alborzi clinical microbiology research center, namazi hospital, shiraz university of medical sciences, shiraz, iran,
مرکز تحقیقات عفونی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران،
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شیراز (Shiraz university of medical sciences)

محمدرضا فتاحی | mr fattahi
gastroenterohepatology research center gehrc , shiraz university of medical sciences, shiraz, iran
مرکز تحقیقات کبد و گوارش، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شیراز (Shiraz university of medical sciences)

مجید صادقی زاده | m sadeghizadeh
department of molecular genetics, tarbiat modares university, tehran, iran,
گروه ژنتیک مولکولی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران،
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

نشانی اینترنتی http://armaghanj.yums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-724-4&slc_lang=fa&sid=en
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده عمومی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات