این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
ارمغان دانش، جلد ۲۰، شماره ۸، صفحات ۶۶۶-۶۷۶
عنوان فارسی کلون کردن اپیتوپ‌های خطی آنتی ژن P۱۴-۳-۳ در وکتور pEGFP-N۱ به عنوان یک مدل واکسن DNAجهت القا ایمنی علیه کیست هیداتیک و بررسی بیان آن در رده سلولی CHO
چکیده فارسی مقاله زمینه و هدف: کیست هیداتیک در اثر آلودگی با لارو انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس ایجاد می­شود. در مرحله لاروی این انگل آنتی­ژن­های متعددی تولید می­شود که یکی از این آنتی­ژن­ها، آنتی­ژنی از خانواده پروتئین­های p14-3-3 می­باشد و واکسن نوترکیب آن ایمنی‌زایی قابل توجهی را در موش القا کرده است. با توجه به ایمونوژن­تر بودن نواحی اپی­توپی آنتی­ژن­ها و تولید پاسخ ایمنی Th1 مطلوب هدف از این مطالعه کلون کردن اپی­توپ­های خطی این آنتی­ژن شناسایی شده در وکتور N1–pEGFP بود که در ساخت یک مدل DNA واکسن مؤثر بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی پس از شناسایی اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن p14-3-3 توسط نرم­افزارهای بیوانفورماتیکی، توالی کد­کننده آن به صورت سنتتیک فراهم شد، پس از تکثیر با واکنش PCR و هضم توسط آنزیم محدود کننده ‌XhoI، در وکتور N1 – pEGFP تخلیص شده با روش سمبروک تغییر یافته که همراه با استفاده از CaCl2 وPEG6000 می­باشد کلون شده و کلونی­های مثبت حاوی وکتور نوترکیب ابتدا به روش colony PCR و سپس توالی‌یابی تأیید شد. برای بررسی بیان در سلول­های یوکاریوت با روش الکتروپوریشن به رده سلولیCHO منتقل شدند. یافته­ها: توالی کد کننده اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن P14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس پس از شناسایی، سنتز و تکثیر در وکتورpEGFP-N1 که تخلیص آن با روش جدید به خوبی با حداکثر غلظت پلاسمید و حداقل مقدار RNA همراه است، کلون شده و پس از تأیید کلونینگ، بیان آن نیز در رده سلولی CHO به عنوان نمونه­ای از سلول­های یوکاریوت به صورت موفقیت­آمیز با میکروسکوپ فلورسنت انجام شد و استفاده از سازه حاصل در قالب واکسن ژنی برای بررسی پاسخ ایمنی در مدل­­های موشی در مراحل بعدی پژوهش انجام خواهد شد. نتیجه­گیری: نتایج حاصل از توالی یابی، تأیید کننده کلونینگ صحیح توالی کد کننده اپی­توپ­­­­­های خطی آنتی­ژن &zeta P14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pEGFP-N1 بوده و نتایج حاصل از میکروسکوپ فلورسانس نشانگر بیان موفقیت­آمیز پروتئین نوترکیب در سلول یوکاریوتیCHO می­باشد. واژه‌های کلیدی: اکینوکوکوس گرانولوزوس، کلونینگ، DNA واکسن،P14-3-3 خش وارد کنید
کلیدواژه‌های فارسی مقاله اکینوکوکوس گرانولوزوس،کلونینگ،DNAواکسن، P14-3-3
عنوان انگلیسی Prediction and cloning linear Tcell epitopes of P14-3-3 antigen into pEGFP–N1 as a DNA vaccine model to induse immuno response against hydatidosis and it's expression in CHO cell line
چکیده انگلیسی مقاله ABSTRACT Background & purpose: Hydatidosis is a zoonotic disease that caused by infection with the larvae of Echinococcus granulosus. Different antigens produced in larval stage of this parasite that recombinant vaccine base these antigens created significant immunity in infected animals. One of the important antigens is p14-3-3 that it's recombinant antigen created considerable immunity in mouse models. In this study according to the high immunity of antigen epitopes region the coding sequence of T-cell epitopes of P14-3-3 was cloned into pEGFP-N1vector in order to produce an effective DNA vaccine model to stimulate high level of Th1 immune response. Material and method: In this study bioinformatics tools were used to prediction of linear T-Cell epitopes of Echinococcus granulosus P14-3-3 &zeta antigen. The nucleotide coding sequence of these epitopes was synthesized by PCR. the ampliqon was digested with XhoI restriction enzyme and cloned into pEGFP–N1 vector That has been purificated by modified sambrook method with CaCl2 and PEG6000..Positive colony was selected by direct colony PCR and confirmed by the sequencing.and evaluation of it's expression in Eukaryotic cells was done by transformed to CHO cell line with electroporation. Results: Linear T-cell epitopes of Echinococcus granulosus P14-3-3 after prediction,synthesis and amplification wae successfully cloned into pEGFP-N1 vector that purificated by new method with maximum vector and minimum RNA concentration.The expression of new constract in CHO cell line as a eukaryotic cells achivment by fluorescent microscope and will be used as a DNA vaccine model to evaluation immuno response in mouse models. Discussion: Successfully cloning of The linear T-cell epitppes coding sequence of Echinococcus granulosus P14-3-3&zeta antigen into pEGFP-N1 verificated by sequencing and fluorscent microscope images demonstrated expression of recombinant protein in CHO cell line
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Echinococcus granulosus, DNA vaccine, cloning, P14-3-3
نویسندگان مقاله رقیه مصری | r mesri
1department of cell and molecular biology, kharazmi university, tehran, iran
گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه خوارزمی (Kharazami university)

مجید اسمعیلی زاد | m esmaelizad
2department of central labratoary, razi vaccine and serum research institute, karaj, alborz, iran.
آزمایشگاه مرکزی، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، البرز، ایران
سازمان اصلی تایید شده: موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی (Razi vaccine and serum research institute)

سید عبدالحمید انگجی | sa angaji
1department of cell and molecular biology, kharazmi university, tehran, iran
گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه خوارزمی (Kharazami university)

محمد طهماسب | m tahmaseb
1department of cell and molecular biology, kharazmi university, tehran, iran
گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه خوارزمی (Kharazami university)

مژگان احمدزاده | m ahmadzadeh
1department of cell and molecular biology, kharazmi university, tehran, iran
گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه خوارزمی (Kharazami university)

سمیه محمدی | s mohammadi
1department of cell and molecular biology, kharazmi university, tehran, iran
گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه خوارزمی (Kharazami university)

نشانی اینترنتی http://armaghanj.yums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-249-1&slc_lang=fa&sid=en
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده انگل شناسی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات