این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۸، شماره ۴، صفحات ۳۳-۴۴
عنوان فارسی ارایه روشی نوین در تولید آنتی‌بادی اختصاصی با استفاده ترتیبی از پروتئین نوترکیب و پپتید (مدل PrIPeP)
چکیده فارسی مقاله هدف به‌دست آوردن آنتی‌بادی اختصاصی با ایمن‌سازی توسط پروتئین نوترکیب و خالص‌سازی به کمک پپتید مصنوعی به‌عنوان روشی جدید (مدل PrIPeP). مواد و روش‌ها: آنتی‌ژن پروتئینی با همسانه‌سازی ژن کامل SRY روی ناقل pET28a و بیان پروتئین نوترکیب آن در سویه Bl21 باکتری اشریشیا کلی تولید شد. پپتیدی اختصاصی از این پروتئین نیز طراحی و پس از سنتز برای ساخت ستون خالص‌سازی استفاده شد. پروتئین نوترکیب در ادجوانت فروند به‌صورت امولسیون در آمد و طبق جدول زمانی استاندارد برای ایمن‌سازی در خرگوش به‌کار رفت. به‌عنوان شاهد، پپتید سنتز شده به پروتئین حامل KLH کونژوگه و مانند پروتئین نوترکیب برای ایمن‌سازی استفاده شد. برای بررسی نتایج، ابتدا درستی ایمن‌سازی به‌وسیله روش الایزا بررسی شد. سپس آنتی‌سرم حاصل از تزریق پروتئین نوترکیب (Pro-antisera) با استفاده از ستون خالص‌سازی شامل پپتید کونژوگه به سفارز خالص‌سازی شد (مدل PrIPeP). آنتی‌سرم حاصل از تزریق پپتید کونژوگه به KLH (Pep-antisera) نیز با همین ستون خالص‌سازی شد. در نهایت، اختصاصیت و حساسیت آنتی‌بادی‌های خالص شده نسبت به پروتئین نوترکیب SRY و همچنین چند شاهد منفی (پروتئین نوترکیب HSFY، RBMY و RPS4Y) با استفاده از روش لکه‌گذاری وسترن بررسی شد. نتایج: تیتراسیون با روش الایزا نشان داد که ایمن‌سازی برای هر 2 نوع آنتی‌ژن به‌خوبی و به‌طور اختصاصی انجام شد. همچنین تجزیه و تحلیل آنتی‌بادی‌های خالص کلاس IgG با روش لکه‌گذاری وسترن نشان داد که اختصاصیت و حساسیت آنتی‌بادی در هر دو گروه مناسب است. نتیجه‌گیری: نتایج بررسی حاضر نشان داد که با استفاده از مدل PrIPeP می‌توان از یک سو به آنتی‌بادی‌های اختصاصی دست یافت که علیه ساختار طبیعی پروتئین تولید شده‌اند و از سوی دیگر از چالش‌های کونژوگاسیون پپتید به پروتئین حامل اجتناب کرد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Introduction of a New Method for Mono-specific Antibody Production by Sequential use of Recombinant Proteins and Synthetic Peptides (PrIPeP model)
چکیده انگلیسی مقاله Objective: This study attempted to generate monospecific antibodies through immunization with recombinant proteins and subsequent purification by synthetic peptides (the PrIPeP model). Methods: The SRY gene was cloned on a pet-28a vector and the recombinant protein was expressed in the Escherichia coli (E.coli) BL21 strain. The purified antigen was emulsified in Freund's adjuvant and injected into rabbits according to a standard time table. Then, a specific peptide was designed, synthesized, and conjugated to sepharose 4B to generate an affinity purification column. As a control, the peptide was conjugated to KLH and used for immunization, as above. Antisera against the conjugated peptide (Pep-antisera) and SRY recombinant protein (Pro-antisera) were evaluated by ELISA and subsequently subjected to the affinity purification column. Sensitivity and specificity of the purified antibodies against SRY recombinant protein as well as negative controls (recombinant HSFY, RBMY, and RPSFY) were assessed by Western blot analysis. Results: Titration by ELISA confirmed proper immunization and specificity of both antigens. Western blot analysis validated the specificity and sensitivity of the IgG class purified antibodies. Conclusion: By applying the PrIPeP model, it is possible to develop antibodies against the native structure of a protein whilst avoiding challenges of peptide-carrier protein conjugation.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله مهدی علیخانی | mehdi alikhani
department of molecular systems biology at cell science research center, royan institute for stem cell biology and technology, acecr, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه رویان (Royan institute)

سمانه ادیب | samane adib
department of anatomy, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه رویان (Royan institute)

شهاب میرشاه ولدی | shahab mirshahvaladi
department of molecular systems biology at cell science research center, royan institute for stem cell biology and technology, acecr, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

ابوالفضل خیمه | abolfazl kheimeh
animal core facility of reproductive biomedicine research center, royan institute for biotechnology, acecr, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه رویان (Royan institute)

طاهره مدرسی | tahereh modarresi
department of andrology, reproductive biomedicine research center, royan institute for reproductive biomedicine, acecr, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه رویان (Royan institute)

مرجان صباغیان | marjan sabbaghian
department of andrology, reproductive biomedicine research center, royan institute for reproductive biomedicine, acecr, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه رویان (Royan institute)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_14019_0f3c1ebf1c2046e7b48780b8b6955171.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات