این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۸، شماره ۴، صفحات ۴۵-۶۰
عنوان فارسی همسانه‌سازی و بیان ژن زیر واحد اتصالی سم شبه شیگا نوع ۲ و بررسی ایمنی‌زایی آن در مدل حیوانی
چکیده فارسی مقاله هدف: اشریشیا کلی انتروهموراژیک با قدرت تولید سم شبه شیگا نوع 2 عامل اصلی اسهال خونی باکتریایی است. این عامل بیمازی‌زا در برخی موارد می‌تواند منجر به نشانگان اورمی همولیتیک و نارسایی کلیوی با درجه مرگ ‌و میر بالا شود. تولید سم شبه شیگا نوع 2 اصلی‌ترین عامل بیماری‌زایی سویه‌های اشریشیا کلی انتروهموراژیک است و از این ‌رو خنثی‌سازی سم با آنتی‌بادی‌های سرمی اختصاصی به‌عنوان راه‌کار اصلی در روش‌های پیشگیری و درمان ضد نشانگان اورمی همولیتیک مطرح است. در این تحقیق، همسانه‌سازی، بیان پروتئین نوترکیب، خالص‌سازی و ایمنی‌زایی زیرواحد B سم شبه شیگا نوع 2 (Stx2B) که عامل اتصال سم به سلول‌های هدف است، شرح داده شده است. مواد و روش‌ها: ژن stx2B با استفاده از PCR تکثیر و در ناقل بیانی pET28a همسانه‌سازی و ناقل بیانی به اشریشیا کلی BL21-DE3 منتقل شد. پروتئین نوترکیب rSTX2B پس از ارزیابی بیان با استفاده از ستون نیکل خالص‌سازی شد. پروتئین rSTX2B تخلیص شده به‌عنوان کاندید ایمنی‌زایی به روش زیرپوستی در سه مرحله به موش‌های نژاد Balb/c تزریق شد. تولید آنتی‌بادی سرمی ضد rSTX2B در خون موش‌های ایمن شده با استفاده از آزمون الایزا ارزیابی شد. خنثی‌سازی سم در شرایط آزمایشگاهی روی سلول‌های Hela و در شرایط درون بدنی با آزمون چالش موش‌های ایمن با سم شبه شیگا نوع 2 بررسی شد. نتایج: با بررسی میزان IgG القا پاسخ ایمنی عمومی در موش‌های ایمن شده تأیید شد. نتایج آزمون سلول‌های Hela نشان داد که سرم موش‌های ایمن قادر به خنثی‌سازی سم است. در آزمون چالش حدود 70 درصد از موش‌های ایمن زنده ماندند. نتیجه‌گیری: نتایج نشان داد که پروتئین نوترکیب rSTX2B می‌تواند منجر به القای پاسخ ایمنی خنثی‌کننده در موش شود و می‌تواند به‌عنوان یکی از اجزای اصلی واکسن علیه اشریشیا کلی انتروهموراژیک به کار برده شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Cloning and Expression of the Binding Subunit of Shiga-Like Toxin Type 2 Gene and Immunization Study in an Animal Model
چکیده انگلیسی مقاله Objective: Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) which produces shiga-like toxin type 2 (Stx2) is a major cause of bloody diarrhea. This pathogen can lead to hemolytic uremic syndrome (HUS) and renal failure with a high mortality rate. Stx2 is the major virulence factor of EHEC. Neutralization of toxin by specific antibodies is known to be the best way to prevent and cure HUS. In this study, we describe the cloning, expression, purification, and immunization of the Stx2B subunit which is responsible for toxin binding to the target cell surface. Methods: The Stx2B gene was amplified by PCR and subcloned into a pET28a expression vector and transformed into E. coli BL21-DE3. We evaluated recombinant protein expression and rSTX2B was purified by the Ni-NTA column. The purified rSTX2B was administered subcutaneously to BALB/c mice in three separate doses as an immunogenic candidate. The raising of anti-rSTX2B antibodies in immunized mice sera was evaluated by Elisa assay. The neutralizing immune response was verified by an in vitro assay on HeLa cells and an in vivo assay on mice by challenging them with a lethal dose of Stx2. Results: The IgG titration verified the induction of a humeral response in immunized mice. The HeLa cell assay indicated that the Stx2 toxin was neutralized by immune mice sera. In the challenge assay, 70% of immunized mice survived. Conclusion: Recombinant rSTX2B can induce a neutralizing immune response in mice. It can be used as a major component in development of EHEC vaccines.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله روح اله کاظمی | rouhollah kazemi
department of plant bioproducts, institute of agricultural biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology nigeb , tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

عسل اخویان طهرانی | asal akhavian tehrani
department of plant bioproducts, institute of agricultural biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology nigeb , tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

محیات جعفری | mahyat jafari
department of plant bioproducts, institute of agricultural biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology nigeb , tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

جعفر امانی | jafar amani
applied microbiology research center, baqiyatallah university of medical sciences, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

امیر موسوی | amir mousavi
department of plant bioproducts, institute of agricultural biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology nigeb , tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (Baqiyatallah university of medical sciences)

علی هاتف سلمانیان | ali hatef salmanian
department of plant bioproducts, institute of agricultural biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology nigeb , tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_14017_a0c334777db94b08ce1a604179f2bd03.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات