این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۶، شماره ۳، صفحات ۶۵-۷۹
عنوان فارسی ترانسفکشن سلول‌های کبدی به‌وسیله DNA کلون شده ویروس هپاتیت B و ارزیابی میزان رونویسی و بیان نشانگرهای اختصاصی ویروسی و ژن‌های القا کننده اینترفرون
چکیده فارسی مقاله هدف: با توجه به اینکه واکسن موثری علیه ویروس هپاتیت B(HBV) وجود دارد، شیوع جهانی عفونت با این ویروس کاهش چشمگیری پیدا نکرده است.HBV برخلاف بسیاری از ویروسهای بیماری زا در انسان قابلیت کشت در آزمایشگاه را ندارد. اما ترانسفکشن سلولهای کبدی با منشا انسانی بوسیله پلاسمید کد کننده ژنوم کامل HBV می تواند منجر به تولید ویروس عفونی گردد. در صورت راه اندازی و بهینه سازی کشت سلولی، تکثیر ژنوم ویروس در این سلولها را می توان با استفاده از PCR تشخیص داد، همچنین ترشح آنتی ژن سطحی ویروس بوسیله الایزا قابل اندازه گیری است. ژنهای القاء کننده اینترفرون(ISGs) در پاسخ به درمانHBV با داروی اینترفرون آلفا بیان می شوند، در نتیجه اندازه گیری این ژنها می تواند در موارد عدم پاسخ دهی به این دارو موثر باشد. در نتیجه در مطالعات دارویی علاوه بر تشخیص اثر ماده مورد نظر بر شاخصهای ویروسی، با سنجش ISG ها می توان اثر دارو را نیز در فعال سازی ایمنی ذاتی علیه HBVمورد بررسی قرار داد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه ترانسفکشن سلولهای کبدی Huh-7 بوسیله پلاسمید pCH-9/3091 انجام شد و سپس بیان HBsAg و همچنین تولید mRNA های ویروسی مورد بررسی قرار گرفتند. علاوه بر این با استفاده از آغازگرهای شناسایی کننده ISG ها، روش شناسایی آنها راه اندازی و بهینه سازی شد. نتایج: سلولهای Huh-7 از تکثیر HBV حمایت می کنند. انجام الایزا بر روی مایع رویی سلولها بیشترین میزان HBsAg را در 72 ساعت پس از ترانسفکشن تایید می کند. با استفاده از آغازگرهایی که برای نواحی S و pg/pC طراحی شده، رونویسی و تکثیر ژنوم ویروس نشان داده شد. نتایج PCR با استفاده از پرایمرهای ISG بر روی سلولهای ترانسفکت شده با پلاسمید ویروسی نشان داد که ممکن استHBV در بالا بردن میزان ISG ها در سلولهای Huh-7 نقشی نداشته باشد. نتیجه‌گیری: یافته ها نشان داد این سیستم می تواند راه حلی باشد در جهت مطالعه بر روی عملکرد ژنوم ویروس، آزمایش دارو ها و واکسنهای جدید و همچنین بررسی مکانیسم های مقاومتهای دارویی که در حال حاضر پاسخ به داروهای کنونی از جمله اینترفرون آلفا را با مشکل مواجه نموده است.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Transfection of a Hepatoma Cell Line by Cloned HBV DNA and Evaluation of Transcription and Expression of Viral-specific Markers and Interferon Stimulated Genes
چکیده انگلیسی مقاله Objective: Despite availability of an effective vaccine against hepatitis B virus (HBV), the global prevalence of this virus infection has not diminished significantly. Contrary to numerous other human viruses, HBV does not have the ability to propagate in cell culture. However, infectious virus has been produced by transfection of human hepatoma cells with plasmids that contain full length HBV genome. Generation and optimization of appropriate cell culture systems can help us in demonstrating the quality of genome replication by PCR as well as expression of surface antigen secretion. Interferon stimulating genes (ISGs) are usually produced in response to interferon and can be determined as a measure of response to IFN-therapy. Therefore, in pharmacological studies, in addition to assessing the effects of a medicine on viral determinants of replication, its' effects on stimulation of various ISGs, as indicators of innate immune responses, can be achieved. Methods: In this study, we transfected the Huh-7 hepatoma cell line with pCH-9/3091. HBsAg production and viral mRNA transcription were subsequently evaluated. In this system, by using ISGs-specific primers, the ISG mRNAs recognition method was optimized and utilized. Results: Huh-7 cells supported HBV replication. The peak HBsAg secretion was observed at 72 h post-transfection. By using designed primers for the S and pg/pC regions, transcription and genome replication of the virus was shown. RT-PCR results for ISG production by transfected cells showed no role for HBV in enhancement of ISGs levels in Huh-7 cells. Conclusion: The results indicated that this system can be used for functional studies of HBV-specific genes as well as assessment of the effects of new drugs or new vaccines. In addition, it may be used to study the mechanisms of drug resistance that have resulted in difficulties in response to HBV antivirals, including IFN-α.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله حسام میرشهابی | hessam mirshahabi
department of virology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

محسن کریمی | mohsen karimi
biotechnology research center, pasture institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

فریدا بهزادیان | farida behzadian
department of molecular genetics, research center for science and biotechnology, malek ashtar university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

فرزانه صباحی | farzaneh sabahi
department of virology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6248_7dc6c0e707ad66f4cb327c238ee24b5e.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات