این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۶، شماره ۱، صفحات ۱۱-۲۱
عنوان فارسی افزایش بیان عامل فعال کننده پلاسمینوژن بافتی نوترکیب در سلول‌های CHO با استفاده از ناقل بیانی حاوی نواحی متصل شونده به ماتریکس و روش فعال‌سازی راه‌ انداز
چکیده فارسی مقاله هدف: ایجاد رده‌های سلولی دارای بیان بالا یک مرحله محدود کننده اصلی در روند تولید پروتئین‌های نوترکیب دارویی است. در این مطالعه اثر به‌کارگیری ناحیه متصل شونده به ماتریکس ژن اینترفرون بتای انسانی به‌همراه روش فعال‌سازی راه‌انداز از طریق پروتئین E1A 13S بر بیان فاکتور فعال کننده پلاسمینوژن بافتی (t-PA) در سلول‌های تخمدان هامستر چینی بررسی شده است. مواد و روش‌ها: ناحیه متصل شونده به ماتریکس در سمت ΄5 و΄3 واحد بیان کننده t-PA در ناقل pTPA کلون شد تا ناقل pMTPA به‌دست آید. پس از ترانسفکشن سلول‌ها با ناقل‌های pTPA و pMTPA، رده‌های سلولی پایدار ایجاد شده و میزان بیان t-PA برای هر رده تعیین شد. در مرحله بعد، پلاسمید بیان کننده E1A 13S به سلول‌های پایدار ترانسفکت شده و میزان بیان t-PA پس از 72 ساعت اندازه‌گیری شد. نتایج: الحاق ناقلین pTPA و pMTPA به ژنوم سلول CHO از طریق انجام PCR روی DNA ژنومی سلول‌های پایدار تأیید شد. بررسی میزان بیان t-PA افزایش بیان به‌میزان سه برابر را در سلول‌های ترانسفکت شده با ناقل pMTPA در مقایسه با رده ایجاد شده با pTPA نشان داد. بیان موقتی E1A 13S در رده‌های پایدار منجر به افزایش تیتر t-PA به 1771 واحد در هر میلی‌لیتر در سلول‌های ایجاد شده با ناقل pMTPA شد. نتیجه‌گیری: نتایج این تحقیق نشان‌دهنده آنست که به‌کارگیری ناحیه متصل شونده به ماتریکس در ناقل بیانی به‌همراه روش فعال‌سازی راه‌انداز می‌تواند به‌صورت مؤثر میزان بیان پروتئین‌های نوترکیب در سلول‌های CHO را افزایش دهد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Enhancement of Recombinant Human Tissue Plasminogen Activator Expression in CHO Cells using Matrix Attachment Region Containing Vectors in Combination with Promoter Activation Strategy
چکیده انگلیسی مقاله Objective: Development of high producing mammalian cell lines is a major bottleneck in manufacturing of recombinant therapeutic proteins. This study examines the effect of using the matrix attachment region from the human interferon beta gene in combination with promoter activation strategy with E1A 13S protein on human tissue plasminogen activator (t-PA) expression in Chinese hamster ovary (CHO) cells. Methods: The matrix attachment region was cloned in 3΄ and 5΄ flanking sides of the t-PA expression cassette in pTPA vector to generate pMTPA. After transfection of the cells with pTPA and pMTPA vectors, stable cell pools were developed and the t-PA expression level determined for each stable cell line. In the next step, E1A 13S expression plasmid was transfected to stable cell pools and t-PA titers were measured after 72 hours. Results: Integration of pTPA and pMTPA vectors in the CHO genome was confirmed by PCR analysis on genomic DNA of stable cell pools. Analysis of the t-PA expression level showed a three-fold enhancement in pMTPA transfected cells compared to pTPA-containing cells. t-PA expression was further enhanced up to 1771 U/ml by transient expression of E1A 13S in pMTPA stable cell pools. Conclusion: These results have shown that incorporation of matrix attachment region in an expression vector in combination with promoter activation can effectively enhance recombinant protein expression levels in CHO cells.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله اعظم رحیم پور | azam rahimpour
department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

بهروز وزیری | behrouz vaziri
department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

فرزانه برخورداری | farzaneh barkhordari
department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

لیلا نعمت الهی | leila nematollahi
department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

احمد عادلی | ahmad adeli
department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

فریدون مهبودی | fereidoun mahboudi
department of medical biotechnology, biotechnology research center, pasteur institute of iran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6241_7a2d7e00ec5139c7b5cab96b73ef9a94.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات