این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۵، شماره ۱، صفحات ۱-۱۲
عنوان فارسی تولید لنتی‌ ویروس‌های نوترکیب بیان کننده miR-۱۶ توسط ترانسفکشن موقت سلول‌های ۲۹۳T
چکیده فارسی مقاله هدف از این مطالعه تولید لنتی‌ویروس‌های بیان کننده miR-16 است. پس از ترانسداکشن، تغییرات ایجاد شده در سطوح بیانی این miRNA و پروتئین هدف آن ارزیابی خواهد شد. مواد و روش‌ها: قطعه ژنی حاوی توالی پیش‌ساز miR-16 در پلاسمید لنتی ویروسی کلون شد. سازه نوترکیب همراه با پلاسمید‌های کد کننده پروتئین‌های ساختاری و پوششی ویروس توسط کلسیم-فسفات به رده سلولی 293T ترانسفکت شد. سوپ سلولی جمع‌آوری و ذرات ویروسی توسط اولتراسانترفیوژ رسوب داده شد و تعیین تیتر ویروس توسط میکروسکوپ فلورسانت و روش فلوسایتومتری انجام یافت. تغییرات در سطوح بیانی miR-16 و پروتئین هدف آن به‌ترتیب توسط روش‌های Real-time PCR و لکه‌گذاری وسترن ارزیابی شد. نتایج: تأیید حضور ژن در پلاسمید و درستی توالی آن توسط کلونی-PCR، هضم آنزیمی کلون‌های مثبت و توالی‌یابی انجام شد. پس از ترانسفکشن همزمان سلول‌های 293T با پلاسمید لنتی-miR و پلاسمید‌های ساختاری و پوششی ویروس و تعیین تیتر ذرات ویروسی تغلیظ شده، سلول‌های مورد نظر با لنتی‌ویروس نوترکیب آلوده شدند. بیشینه بیان GFP در بیش از 80 درصد سلول‌های آلوده شده با لنتی‌ویروس در MOI=1 حاصل شد. بررسی سطوح بیانی miR-16 توسط Real-time PCR نشان داد که بیان این میکرو RNA در سلول‌های آلوده شده با لنتی‌ویروس واجد miR-16 در مقایسه با گروه کنترل افزایش محسوسی دارد. تجزیه و تحلیل لکه‌گذاری وسترن نیز نشان داد بیش بیان miR-16 سبب کاهش بیان پروتئین BCL-2 می‌شود. نتیجه‌گیری: سیستم بیانی لنتی‌ویروسی ارایه شده می‌تواند به‌عنوان ابزاری در راستای تحویل‌رسانی مؤثر مقلدهای میکرو RNA به سلول پیشنهاد شود
کلیدواژه‌های فارسی مقاله میکرو RNA، لنتی‌ویروس، ترانسفکشن، ترانسداکشن،
عنوان انگلیسی Production of Recombinant Lentiviruses Expressing miR-16 by Transient Transfection of 293T Cells
چکیده انگلیسی مقاله Objective: The aim of the present study was the production of recombinant lentviruses that express miR-16. After transduction, altered expression levels of miRNA and its target protein were analyzed. Methods: A DNA fragment that contained the miR-16 precursor was cloned in a lentiviral plasmid. Lentiviral vector particles were produced by transient calcium phosphate co-transfection of 293T cells with the combined lenti-miR, structural and packaging plasmids. Viral supernatants were harvested and concentrated by ultracentrifuge. Virus titration was determined by fluorescent microscopy and flow cytometry. Altered expression levels of miR-16 were evaluated by real-time PCR; its protein target was evaluated by Western blot. Results: The identity of DNA was established by colony-PCR, enzymatic digestion of positive clones, and DNA sequencing. After co-transfection of 293T cells with the combined lenti-miR, structural and packaging plasmids, viral particles were concentrated and the virus titer determined. Maximum expression of the GFP reporter gene was obtained in more than 80% of the cells transduced with lentivirus at MOI=1. Real-time PCR assay showed that miR-16 expression levels significantly increased in transduced cells compared with the control group. As shown by Western blot analysis, miR-16 overexpression downregulated Bcl-2 expression at the protein level. Conclusion: This lentivirus expression system could be considered as a tool for efficient delivery of produced miRNAs to cells.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله microRNA, Lentivirus, Transfection, Transduction
نویسندگان مقاله صادق باباشاه | sadegh babashah
department of genetics, faculty of biological sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

مجید صادقی زاده | majid sadeghizadeh
department of genetics, faculty of biological sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

مسعود سلیمانی | masoud soleimani
department of hematology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

عباس حاجی فتحعلی | abbas hajifathali
taleghani hospital, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

مصطفی رضایی طاویرانی | mostafa rezaei tavirani
proteomics research center, faculty of paramedical sciences, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی (Shahid beheshti university of medical sciences)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6211_f12c74bec5c80204a410323630ec0ffc.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات