این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۵، شماره ۱، صفحات ۶۱-۷۲
عنوان فارسی بیان و تعیین خصوصیات آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز باکتریایی در مخمر پیکیا پاستوریس با هدف تجزیه نوروتوکسین‌های ارگانوفسفره
چکیده فارسی مقاله هدف: آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز آنزیم هومودیمری است که قادر به هیدرولیز پیوندهای فسفواستر و کاهش سمیت نوروتوکسین‌های ارگانوفسفره است. این خصوصیت آنزیم، ارگانوفسفر هیدرولاز را ابزار ارزشمندی برای تجزیه، تشخیص و زیست‌پالایی سموم ارگانوفسفره می‌سازد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه ژن آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز باکتری سودوموناس دیمینوتا پس از بهینه‌سازی برای مخمر پیکیا پاستوریس و تبدیل آن به فرم ترشحی (آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز به فرم غشایی در باکتری وجود دارد) در ناقل بیانی pPICZαB کلون شد. پس از ترانسفورم و القای مخمرهای نوترکیب، آنزیم به لحاظ تجزیه سموم، تعیین پارامترهای بیوشیمیایی و سینتیکی ارزیابی شد. نتایج: آنزیم به میزان 49/7 مرتبه و با فعالیت ویژه 103 × 421/0 واحد در میلی‌گرم پروتئین و با بازده 33 درصد از محلول رویی محیط کشت، جداسازی و خالص‌سازی شد. آنزیم بهترین فعالیت و پایداری را تا دمای 50 درجه سانتی‌گراد و pH 7 تا 10 از خود نشان ‌داد. با استفاده از سوبسترای پارااکسون، ثابت میکائیلیس (Km) و حداکثر سرعت آنزیم (Vmax) به‌ترتیب 96/45 میکرومولار و 23/11 میکرومولار در دقیقه محاسبه شد. آنزیم نسبت به کاتیون‌های دو ظرفیتی بسیار حساس بود و توسط عوامل واسرشته کننده نظیر سدیم دودسیل سولفات فعالیت خود را از دست ‌داد. وزن مولکولی آنزیم با استفاده از الکتروفورز SDS-PAGE حدود 40 کیلودالتون تخمین زده شد. نتیجه‌گیری: بر اساس نتایج بررسی حاضر آنزیم به‌طور مؤثری سموم ارگانوفسفره نظیر پارااکسون را تجزیه می‌کند. فعالیت و پایداری در pH و دماهای بالا و همچنین پایین بودن ثابت میکائیلیس آنزیم نسبت به انواع باکتریایی، آن را کاتالیزگر زیستی مناسبی برای کاربردهای زیست‌پالایی و تشخیصی می‌سازد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله ترکیبات ارگانوفسفره، ارگانوفسفر هیدرولاز، پیکیا پاستوریس،
عنوان انگلیسی Expression and Characterization of Bacterial Organophosphorus Hydrolase in Pichia pastoris with the Intent to Degrade Organophosphate Neurotoxins
چکیده انگلیسی مقاله Objective: Organophosphorus hydrolase (OPH) is a homodimeric enzyme that can hydrolyze phosphoester bonds and reduce the toxicity of organophosphorus compounds. This makes OPH a suitable element for the biodegradation of these compounds. Methods: We successfully cloned the OPH gene from Pseudomonas diminuta, after optimization for Pichia pastoris, into a yeast expression vector (pPICZαB). After transformation and induction of recombinant yeasts, the expressed enzyme was investigated for its biochemical and kinetical parameters. Results: The enzyme was purified 7.49-fold to a specific activity of 0.421×103 U/mg protein from the supernatant with a yield of 33%. The purified enzyme was able to degrade organophosphates. It had an optimal activity and stability up to 50°C, and a pH range of 7.0-10.0. The enzyme had a Km of 45.96 µM and a Vmax of 11.23 µM/min (421 µM/min/mg) for paraoxon as a substrate. This enzyme was sensitive to divalent cations and inactivated by denaturing compounds such as SDS. The molecular mass of the purified enzyme as estimated by SDS–PAGE analysis was approximately 40 kDa. Conclusion: In this study, the purified enzyme effectively hydrolyzed paraoxon, an organophosphorus compound. The activity and stability of this enzyme at high temperatures and pH, and low Km in comparision with bacterial isolates could make it an attractive biocatalyst for applied bioremediation and biosensing
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله سعید نژاوند | saeed najavand
department of clinical biochemistry, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

عباس صاحبقدم لطفی | abbass sahebghadam lotfi
1- department of clinical biochemistry, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran2- department of animal and marine biotechnology, national institute of genetics engineering and biotechnology, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

افشین محسنی فر | afshin mohsenifar
assistant professor, department of toxicology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

ساره ارجمند | sareh arjmand
department of animal and marine biotechnology, national institute of genetics engineering and biotechnology, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

علی مطاع | ali mota
department of clinical biochemistry, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6213_f7d28f5817f7731a0329c2165dcd0e14.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات