این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۴، شماره ۳، صفحات ۶۹-۷۹
عنوان فارسی ساخت ناقل بیانی حاوی ژن VP۱ ویروس تب برفکی سویه FMDV type O/IRN/۱/۲۰۰۷) O) تأیید پروتئین تولید شده در سلول‌های کلیه بچه هامستر (BHKT۷) و ارزیابی پاسخ ایمنی در مدل موشی
چکیده فارسی مقاله هدف: هدف ساخت ناقل بیانی حاوی ژن VP1 ویروس تب برفکی سویه O جداسازی شده در ایران، بیان پروتئین و ارزیابی پاسخ‌های ایمنی در موش است. مواد و روش‌ها: سویه ویروس تب برفکی O از گوساله‌ای در شهر ری در سال 1386 جداسازی، سروتایپ و ژن VP1 این ویروس در ناقل PTZ57R/T و ناقل بیانی pcDNA3.1+ الحاق شد. برای بررسی بیان پروتئین، ژن VP1 بدون کدون خاتمه در ناقل pEGFP-N1 بالادست ژن GFP کلون شد. ناقل‌های pEGFP-N1-VP1 و pcDNA3.1+-VP1 در رده سلولی کلیه بچه هامستر ترانسفکت و بیان پروتئین الحاقی GFP-VP1 با میکروسکوپ معکوس فلوئورسنت و بیان پروتئینVP1 به روش الکتروفورز عمودی پروتئین‌ها و لکه‌گذاری وسترن تأیید شد. ناقل بیانی pcDNA3.1+-VP1 به‌عنوان DNA واکسن به موش‌ها تلقیح و پاسخ آنتی‌سرم خنثی کننده (SNT) و قدرت تکثیر لنفوسیت‌های(T (SI در این حیوانات اندازه‌گیری شد. نتایج: هضم آنزیمی ناقل‌های کلون شده با ژن VP1، ورود این ژن در سه ناقل را تأیید و بیان پروتئین VP1 در ناقل بیانی pcDNA3.1+ به روش لکه‌گذاری وسترن با مشاهده باند اختصاصی پروتئین هدف کاملاً تأیید شد. وجود لکه‌های سبز نیز بیان پروتئین الحاقی VP1-GFP را تأیید نمود. مقادیر SNT و SI در گروه موش‌های تلقیح شده با DNA واکسن نسبت به گروه‌های کنترل دارای افزایش معنی‌داری بود. نتیجه‌گیری: این ژن با موفقیت تکثیر، کلون و بیان شد. با توجه به تأیید بیان پروتئین VP1 و افزایش معنی‌دار SNT و SI از ناقل pcDNA3.1+-VP1 به‌عنوان DNA واکسن استفاده شد و پاسخ‌های ایمنی در مدل موشی ارزیابی شد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله ویروس تب برفکی، ناقل، واکسن، پروتئین VP1،
عنوان انگلیسی Construction of pcDNA3.1+ vector containing FMDV type O/IRN/1/2007-VP1 gene, confirmation of protein expression in BHKT7 cells and evaluation of immune response in mice model
چکیده انگلیسی مقاله Objective: The aim of this study was to construct a pcDNA3.1+ vector containing FMDV type O/IRN/1/2007-VP1 gene, protein expression in BHKT7 cells and evaluation of immune response in BALB/c mice. Materials and Methods: FMDV type O/IRN/1/2007 was isolated from a cattle in Ray in 2007 and serotyped. The purified VP1 gene was sub-cloned into the PTZ57R/T vector and pcDNA3.1+ expression vector. The PCR product of Vp1 gene without stop codon was sub-cloned upstream of EGFP gene into the pEGFP-N1 vector to evaluate VP1-GFP fusion protein expression. The pcDNA3.1-VP1 and pEGFP-VP1 vectors were transfected into BHKT7 cell line. The expression of VP1 protein was evaluated by SDS-PAGE, western blotting and florescent analysis of VP1-GFP fusion protein. The mice were injected subcutaneously by pcDNA3.1-VP1 vector as DNA vaccine and titration of neutralizing antiserum and T cell proliferation assay were done to evaluate the immune response. Results: Insertion of VP1 gene was confirmed by double digestion of sub-cloned PTZ57R/T, pcDNA3.1+ and pEGFP-N1 vectors. The specific band in western blotting was also confirmed the VP1 protein expression in BHKT7 cells. The expression of VP1-GFP fusion protein was observed under the immune-florescent inverted microscopy as more green florescent spots versus expression of GFP protein, alone. The neutralizing antiserum titer and T cell proliferation increased significantly in the group of mice vaccinated with pcDNA3.1+-VP1 vector verses control groups (P< 0.05). Conclusion: The results showed that the target gene was amplified, cloned in the cloning and expression vectors and protein expression was confirmed successfully. According to the confirmed VP1 protein expression and increasing neutralizing antiserum titer and T cell proliferation by pcDNA3.1+-VP1 vector (P< 0.05), it can be used as DNA vaccine against FMDV type O/IRN/2007.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Foot and Mouth Disease Virus, Vector, Vaccine, VP1 protein
نویسندگان مقاله فرحناز معتمدی سده | farahnaz motamedi sedeh
ph.d. student, department of virology, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

حوریه سلیمان جاهی | hooreih soleimanjahi
associated professor, department of virology, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

امیررضا جلیلیان | amirreza jalilian
associated professor, department of nuclear medicine, nuclear agriculture department, nuclear science and technology research institute, tehran iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

همایون مهروانی | homayoon mahravani
head of fmd department razi vaccine and serum research institute
سازمان اصلی تایید شده: موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی (Razi vaccine and serum research institute)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6193_f4941d558acd01461a21d9085f2c3f75.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات