این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۴، شماره ۲، صفحات ۱۳-۲۳
عنوان فارسی طراحی، ساخت و ارزیابی بیان پلاسمید نوترکیب pIRES-Igk/mIL۱۸/Fc با هدف استفاده در مطالعات واکسن
چکیده فارسی مقاله هدف: اینترلوکین 18 سایتوکاینی است که نقش مهمی در پاسخ سلول‌های T کمکی نوع یک بازی می‌کند و بنابراین پلاسمید بیان کننده آن، به‌عنوان یک ادجوانت قوی ژنتیکی در زمینه مطالعه واکسن‌های DNA به‌شمار می‌رود. در این مطالعه پلاسمید جفت بیانی کد کننده اینترلوکین 18، ترشحی (و به‌صورت متصل با قسمتی از FCγ2a) ساخته شد و بیان این سایتوکین نوترکیب ارزیابی شد. مواد و روش‌ها: RNA از سلول‌های تحریک شده طحال موش استخراج و با استفاده از RT-PCR قطعات cDNA متعلق به اینترلوکین 18 موشی (mIL-18) و بخشی از توالی FCγ2a ساخته شد. در ادامه به منظور ساخت قطعه mIL-18/Fc ابتدا قطعات FC و اینترلوکین 18 موشی در پلاسمید pSL1180 وارد شده و سپس این قطعه در پلاسمید pSectag2a به منظور اضافه شدن توالی نشانه کاپای ایمنوگلبولین (Igk) کلون شد. در نهایت Igk/mIL-18/Fc درمیان سایت آنزیمی NheI/XmaI، پایین دست ناحیه پروموتوری سیتومگالوویروس، در ناقل pIRES2-EGFP کلون و پلاسمید pIRES-Igk/mIL-18/Fc ساخته شد. سپس این پلاسمید در رده سلولی HEK293T به‌وسیله محلول ترانسفکشن توربوفکت ترانسفکت شده و بیان آن با روش الایزا ارزیابی شد. نتایج: بررسی هضم آنزیمی پلاسمیدهای pSL-mIL-18، pSL-mIL-18/Fc، pSec-mIL-18/Fc و pIRES-Igk/mIL-18/F، با استفاده از آنزیم‌های اختصاصی مورد استفاده در کلونینگ، منجر به جداسازی قطعات مورد انتظار شد و سپس درستی ترادف و قالب بیان پلاسمید pIRES-Igk/mIL-18/F با روش توالی‌یابی تأیید شد. علاوه بر این بیان و ترشح سایتوکین نوترکیب در محلول رویی سلول‌های ترانسفکت شده HEK293T در مقایسه با کنترل ترانسفکت تأیید شد. نتیجه‌گیری: در حالی‌که پلاسمید pIRES-Igk/mIL-18/Fc قابلیت کلونینگ و بیان آنتی‌ژن مد نظر را داشته، همچنین قابلیت بیان پروتئین اینترلوکین 18 را به‌عنوان یک ادجوانت قوی ژنتیکی را به‌همراه دارد. این نتایج در طراحی یک واکسن DNA کارا به‌منظور ارتقای پاسخ ایمنی سلولی مفید بوده و علاوه بر این هدفی جدید در راستای دستیابی به نسل جدید از واکسن DNA به‌حساب می‌آید.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله اینترلوکین 18، پلاسمید جفت بیانی، ادجوانت ژنی، IRES،
عنوان انگلیسی Designing and construction of bicistronic plasmid pIRES-Igk/mIL18/Fc: potential implications for vaccine investigations
چکیده انگلیسی مقاله Objective: IL18 is a cytokine that plays an important role in the T-cell-helper type 1 (Th1) response and hence, plasmid-encoded IL18 is considered as a potent genetic adjuvant for DNA vaccine studies. In this study, a bicistronic eukaryotic plasmid capable of secreting a more stable mouse IL18 (fused with Fcγ2a fragment) was constructed and expression of this chimer cytokine was also assessed. Materials and Methods: RNA purified from stimulated mouse spleenocytes and then cDNA corresponding to mouse IL18 (mIL18) and Fcγ2a fragments were constructed by RT-PCR. Sequential subcloning of mIL18 and IgG2aFc fragments first into pSL1180 and then pSecTag2 plasmids resulted in the fusion of mIL18/Fc and addition of immunoglobulin kappa signal sequence (Igk/mIL18/Fc), respectively. Final cloning of Igk/mIL18/Fc sequence downstream of CMV promoter into the NheI/XmaI sites of pIRES2-GFP plasmid and led to the construction of pIRES-Igk/mIL18/Fc plasmid, which was transfected to HEK293T cell line by Turbofec Transfection reagent and expression analysis, was evaluated by ELISA assay. Results: Restriction enzyme analysis of pSL-mIL18، pSL-mIL18/Fc، pSec-mIL18/Fc and pIRES- Igk/mIL18/Fc plasmids with the enzymes that were applied for clonings led to the isolation of fragments with expected size and then plasmid of pIRES- Igk/mIL18/Fc was also confirmed following sequencing reactions. Moreover, expression and secretion of mIL18 to the medium was evidenced in transfected 293T cells, compared to non-transfected controls. Conclusion: pIRES- Igk/mIL18/Fc plasmid possesses the capacity of the cloning and expression of putative antigen gene under the direction of IRES sequence, and also expression of mIL18 as a great secretive genetic adjuvant. This results can be useful to design an efficient DNA vaccine especially for inducing host cellular immune response, moreover, cab be considered a promising for accessing to new generation of DNA vaccine.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله IL-18, Bicistronic Plasmid, Genetic Adjuvant, IRES
نویسندگان مقاله محمدحسن پوریای ولی | mohammah hassan pouriayevali
department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, tehran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

آرش رضا معمارنژادیان | arash reza memarnejadian
asisstant professor, department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

سیدمهدی سادات | seyad mehdi sadat
ph.d., department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran,
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

مهدی زوار | mahdi zavva
department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

سیدداور سیادت | seyad davar siadat
associated professor, department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

کریستین هارطونیان | christine hartoonian
ph.d, department of virology, pasteur institute of iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

محمدرضا آقا صادقی | mohammad reza aghasadeghi
asisstant professor, department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran
سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (Pasteur institute of iran)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6176_6caee2d693d6f9330d38d5d796a50e49.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات