این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۲، شماره ۳، صفحات ۳۳-۳۹
عنوان فارسی طراحی و ساخت ناقل خاموش‏گر RNA تداخل‏گر (RNAi) نسل دوم برای بررسی کاهش بیان ژن کمک فعال‏کننده RNA گیرنده استروئیدی (SRA)
چکیده فارسی مقاله هدف: روش تداخل RNA یا RNAi بهترین روش خاموش کردن ژن‏ها در سطح ترانس‏کریپتومی شناخته شده است، سرطان‏ها و بیماری‏های ژنتیکی اهداف مهمی برای توسعه روش‏های درمانی مبتنی بر RNAi به‏شمار می‏روند. برای حل مشکل خاموشی موقتی سیستم‏های siRNA، RNA‏های سنجاق سری یا shRNA‏ها ابداع شدند و نسل جدید shRNA‏ها به نام shRNAmir است. سازه خاموش‏گر با ساختار سنجاق سری شبه microRNA (shRNAmir)، رفتاری مشابه یک microRNA طبیعی را درون سلول تقلید می‏کند. کمک فعال‏کننده گیرنده استروئیدی (SRA) یکی از تنظیم‏کننده‏های گیرنده استروئیدی از جمله گیرنده استروژنی (ER) است. بافت‏های پروستات، رحم و سینه بیان پایینی از SRA دارند، در حالی‏که طی تومورزایی آن‏ها بیان SRA افزایش می‏یابد، بنابراین امکان شرکت SRA در تومورزایی یا پیشروی توموری وجود دارد. مواد و روش‏ها: در مطالعه حاضر از روش RNA تداخل‏گر یا RNAi برای خاموش نمودن ژن SRA استفاده شد و سازه خاموش‏گر SRA طراحی و توسط Soe-PCR ساخته شد و سپس در پلاسمید pEGFPC1 که یک ناقل بیانی است کلون گردید. رده سلولی انسانی سرطان پستان (MCF7) با پلاسمید حاصل ترانسفکت شد و بیان SRA در زمان‏های 24، 72 ساعت و 10روز بعد با Real-Time PCR بررسی شد. نتایج: کاهش 60 درصدی در بیان نسبی SRA در تیمارهای 72 ساعت و 10روز بعد مشاهده شد که نشان می‏دهد shRNAmir-SRA با موفقیت توانسته است بیان ژن هدف مطالعه حاضر را به‏طور نسبتاً پایداری خاموش کند. نتیجه‏گیری: با توجه به موفقیت در طراحی و ساخت یک سازه shRNAmir و خاموشی نسبتاً پایدار ژن هدف، این سازه برای مطالعات مختلفی در آینده آماده و مناسب به‏نظر می‏رسد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Designing and development of a silencer vector based on second generation of RNA interference (RNAi) technique to study downregulation of steroid receptor RNA activator (SRA)
چکیده انگلیسی مقاله Objective: RNA interference (RNAi) is the most potent technique for gene silencing in eukaryotic cellular system at transcriptomic level. Genetic disorders and cancers are important targets for therapeutic development of this technique. In order to bypass the temporary dpwnregulation by siRNA, a new generation of shRNA named shRNAmir has developed. Silencing construct with structure similar to microRNA (shRNAmir), mimics a natural microRNA pathway inside the cell. Steroid receptor RNA activator (SRA) is one of the regulators of steroid receptor like ER. Prostate, uterus and breast tissue express a low level of SRA, there is an increase of expression during their tumorgenesis. So SRA may participate in tumorgenesis or proliferation of tumors. Materials and Methods: We used RNAi technique to silence expression of SRA. The SRA silencer was designed and constructed by Soe-PCR, then cloned into an expression vector pEGFPC1. Human breast cancer (MCF7) cells were transfected with silencer plasmid then the changes in the SRA expression estimated by Real-Time PCR at 24, 72 hours and after 10days. Result: The results showed about 60% decrease in relative expression of SRA gene, after 72 hours and 10 days, which shows that shRNAmir–SRA could successfully knockdown the expression of target gene. Conclusion: It seems that the designed shRNAmir may be a suitable tool for a variety of applications because it could stably knockdown the expression of target gene.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله مهدی فروزنده |
department of medical biotechnology, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

سعیده عسکریان |
department of medical biotechnology, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6022_7463dd2cc4271829a3f598651189feac.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات