این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۲، شماره ۳، صفحات ۴۱-۴۹
عنوان فارسی اندازه‏گیری میزان آفلاتوکسین متصل به آلبومین در نمونه سرم با استفاده از روش بهینه شده کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا و آشکارگر فلورسانس
چکیده فارسی مقاله هدف: با توجه به آثار مرگ‏بار آفلاتوکسین‏‌ها و به‏خصوص آفلاتوکسین B1 بر سلامتی انسان، اندازه‌گیری آفلاتوکسین متصل به آلبومین، به‏عنوان یک شاخص مهم میزان در معرض بودن به آفلاتوکسین ضروری به‏نظر می‌رسد. هدف از این پژوهش، بهینه‏سازی روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا و آشکارگر فلورسانس به‏منظور اندازه‏گیری این شاخص در خون است. مواد وروش‏ها: در این مطالعه، از نمونه سرم خون سه گروه رت به‏عنوان کنترل‌ مثبت (تیمار شده با آفلاتوکسین B1)، کنترل (بدون تیمار خاص) و استاندارد (تیمار شده با میزان معینی آفلاتوکسین B1 نشان‏دار با تریتیوم) استفاده شد. پس از جداسازی آلبومین از نمونه سرم با استفاده از آمونیوم سولفات و اسید استیک، خلوص آلبومین با الکتروفورز SDS-PAGE بررسی و غلظت آن به روش برادفورد اندازه‏گیری شد. سپس آلبومین تحت تأثیر پروناز هیدرولیز شد تا آفلاتوکسین متصل به آلبومین به‏صورت آفلاتوکسین- لیزین آزاد شود. سپس آنزیم پروناز و باقیمانده حاصل از هیدرولیز آلبومین توسط استون در سرما رسوب داده و جدا شد. حجم محلول رویی را با دستگاه فریز- درایر تقلیل داده و سپس نمونه تغلیظ شده به دستگاه HPLC تزریق و مقدار آفلاتوکسین موجود در آن در مقایسه با نمونه مشابه حاصل از رت‌های گروه استاندارد، اندازه‏گیری شد. نتایج: با الکتروفورز SDS-PAGE، خلوص آلبومین جدا شده اثبات شد و غلظت آن در نمونه‌های کنترل مثبت، منفی و استاندارد به‏ترتیب 10، 5/12 و 13 میلی‏گرم در میلی‏لیتر به‏دست آمد. در روش HPLC حداقل میزان تشخیص (Detection limit) برای اندازه‏گیری آفلاتوکسین متصل به آلبومین، 20 پیکوگرم در هر میلی‏گرم آلبومین، اختصاصیت روش، 92 درصد و حساسیت آن، 100 درصد تعیین شد. میانگین میزان آفلاتوکسین متصل به آلبومین در سرم رت‏های کنترل مثبت، 10 نانوگرم در هر میلی‏گرم آلبومین محاسبه شد و تکرارپذیری روش طی بارها تکرار، بسیار خوب ارزیابی شد. نتیجه‏گیری: در این تحقیق برای اندازه‏گیری آفلاتوکسین متصل به آلبومین به روش HPLC تغییراتی در فاز متحرک، درصد حلال‌ها و زمان هر آزمایش ایجاد شد و همچنین کروماتوگرافی میل ترکیبی قبل از انجام HPLC حذف شد. بر این اساس HPLC-Fluorescence به‏عنوان یک روش دقیق، حساس و اختصاصی و با بهینه‏سازی ایجاد شده با سرعت و سهولت بیشتر، تکرارپذیری بالاتر و هزینه کمتر می‌تواند برای اندازه‏گیری آفلاتوکسین B1 در سرم استفاده شود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Estimation of aflatoxin-albumin adduct in serum sample by optimized HPLC-fluorescence
چکیده انگلیسی مقاله Objective: With consideration of lethal effects of aflatoxins specially B1 on human health. Estimation of aflatoxin-albumin adduct, as an important marker of aflatoxin exposure, seems essential. The aim of this study is optimization of HPLC-fluorescence method for measurement of this important marker in blood serum. Materials and Methods: In this study, blood serum of three groups of rats as A) positive controls (treated with AFB1), B) negative controls (without treatment) and standard rats (treated with radiolabeled AFB1) were used. After albumin isolation using ammunium sulphate and acetic acid, purity of albumin was tested by SDS-PAGE electrophoresis and albumin concentration was quantified by bradford method. Then albumin was hydrolysed by pronase and aflatoxin bound to albumin was released as aflatoxin-lysine. Pronase was precipitated and albumin was digested by aceton in cold, the volume of supernatant was reduced by freeze-drier and injected into HPLC system. Aflatoxin was quantified in comparison to standard rats samples. Results: The purity of this isolated albumin was confirmed by SDS-PAGE electrophoresis. Albumin concentration in positive, negative and standard samples were 10, 13 and 12.5 mg/ml, respectively. Detection limit (20 pg/mg Alb) for measurement of aflatoxin was determined by HPLC method, specificity and sensitivity of method were 92% and 100% respectively. The mean concentration of AF-Alb adducts in serum of positive control rats was 10 ng/mg Alb and the reproducibility of the method after several repeat was very good. Conclusion: In this study, for AF-Alb adduct quantification by HPLC method, mobile phase, percentage of solvents and run time were changed and the affinity chromatography before HPLC, was deleted. Therefor HPLC- fluorescence which is a precise and specific method, and since it is fast, highly reproducible and cost effective, also with improvement made, could easily be used for the quantification of this important marker in serum.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Aflatoxin-albumin adduct, Aflatoxin B1, HPLC-fluorescence
نویسندگان مقاله فریبا فرجی |
department of clinical biochemistry, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

عبدالامیر علامه علامه | abdolamir allameh
department of clinical biochemistry, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

افشین محسنی فر |
department of toxicology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

بتول اعتمادی کیا |
b.sc., department of clinical biochemistry, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

علی مطاع |
department of clinical biochemistry, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6023_b57d00e1747a229b54ce2cdd233cfad2.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات