این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش‌های آسیب‌ شناسی زیستی، جلد ۱۰، شماره Summer ۲۰۰۸، صفحات ۳۵-۴۱
عنوان فارسی به‌کارگیری یک روش حساسRT-Nested PCR برای تشخیص ویروس هپاتیت C
چکیده فارسی مقاله هدف: ویروس هپاتیت Cیکی از مهمترین عوامل ایجاد کننده هپاتیت ویروسی به شمار می‌رود و تشخیص آن در نمونه‌های مشکوک از اهمیت بالایی برخوردار است. خطر انتقال عفونت ویروسی از طریق تزریق خون و فرآورده‌های آن ناشی از نقص روش‌های غربالگری سرولوژیک در تشخیص اهداکنندگان آلوده‌ای است که در دوره پنجره بیماری هستند. بنابراین تشخیص دقیق و به‌موقع عفونت HCVپیش از ظهور آنتی‌بادی در بدن فرد آلوده از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است. تشخیص ژنوم ویروس HCV در نمونه‌های مشکوک، از گسترش بیماری و شیوع روزافزون آن جلوگیری خواهد نمود. با استفاده از این روش که مبتنی بر شناسایی اسید نوکلئیک ویروس است، می‌توان عفونت را در مراحل ابتدایی و قبل از ظهور آنتی‌بادی‌های اختصاصی تشخیص داد. هدف از این پژوهش طراحی روش بسیار حساس و دقیق RT-Nested PCR‌ برای تشخیص عفونت HCV است. مواد و روش‌ها: روش RT-Nested PCR به‌منظور جداسازی توالی حفاظت شده از ناحیه 5' UTR راه‌اندازی و به کار برده شد. ابتدا با استفاده از روش ترانس کریپتاز معکوس، سنتز cDNA از روی RNAژنوم ویروس صورت گرفت. پس از آن با روش Nested PCR با استفاده دو جفت آغازگر اختصاصی و طی دو مرحله، قطعه مورد نظر تکثیر شد. محـصولات PCR‌ به کـمک روش الـکتروفورز بررسی و همچنین از کیت تجاری RT-PCR یک مرحله‌ای برای مقایسه با نتایج حاصل از روش طراحی شده استفاده شد. نتایج: تعداد 25 نمونه پلاسمای بیماران HCV مثبت که توسط روش‌های الایزا و وسترن بلات مثبت قطعی تشخیص داده شده بودند به‌عنوان نمونه‌های مثبت، رقت های مختلف از یک نمونه بیمار با تیتر بالا به‌عنوان استاندارد و 25 نمونه پلاسمای منفی متعلق به اهداکنندگان خون سالم به‌عنوان کنترل منفی جمع‌آوری شده با این روش بررسی شد. در تمام موارد مثبت، باند مورد نظر روی ژل آگارز مشاهده شد. با توجه به این که در هیچ‌یک از نمونه‌های منفی باند مزبور ملاحظه نشد، مقایسه نتایج حاصل از روش طراحی شده با روش تجاری موجود همبستگی خوبی را نشان داد. نتیجه‌گیری: بر اساس نتایج به دست آمده در این مطالعه، مشخص شد که روش راه‌اندازی شده در تشخیص عفونت HCV‌ از حساسیت و اختصاصیت بالایی برخوردار است. همچنین با توجه به حساسیت این روش، به‌نظر می‌رسد که می‌توان ژنوم ویروس را پیش از تغییرات سرمی و ظهور آنتی‌بادی‌ها تشخیص داد و از این رو می‌توان دوره پنجره را کوتاه‌تر نمود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله PCR دوگانه، RT-PCR، ناحیه .5&apos، UTR، ویروس هپاتیت C،
عنوان انگلیسی The use of a sensitive RT-Nested PCR method for detection of Hepatitis C virus
چکیده انگلیسی مقاله Objective: Hepatitis C virus is the major cause of viral hepatitis and its diagnosis in suspected specimens is of great importance. The risk of transfusion- transmitted virus infection is primarily the result of failure in serological screening tests to detect recently infected donors in the pre-seroconversion window period of infection. Therefore, sensitive and accurate diagnosis of HCV prior to antibody production to reduce window period is necessary. Materials and Methods: In the present study, a sensitive and specific RT-Nested PCR method for detection of a conserved HCV 5'UTR sequence was developed. Two pairs of primers for amplification of the target sequence in two rounds of PCR were selected. The developed RT-Nested PCR assay was performed on HCV-antibody confirmed positive samples as well as negative controls and standard samples. In order to compare the results, One Step RT-PCR kit was used in this study. Results: 25 HCV-positive plasma samples whose positivity were confirmed by ELISA and Western Blot tests, also as well as 10 fold dilutions of a high viral load plasma sample obtained from a HCV-positive patient as standard samples and 25 negative control plasmas from healthy blood donors were collected and tested by this assay. In all of positive samples a 175bp band was observed on agarose gel electrophoresis, but no band could be detected in negative control plasma. Results from developed RT-PCR assay and One Step RT-PCR kit showed a good correlation. Conclusion: According to the results of this study, the developed RT-Nested PCR assay has a good sensitivity and specificity for diagnosis of HCV infection. It has the advantage of viral genome detection prior to seroconversion and can be used to detect HCV infection during window period
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله 5&apos,UTR region Nested PCR RT-PCR, HCV
نویسندگان مقاله کیانا شاهزمانی |
department of virology, school of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

فرزانه صباحی |
department of virology, school of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (Tarbiat modares university)

شاهین مرآت |
digestive disease center, shariati hospital, medical sciences university of tehran, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تهران (Tehran university)

حوری رضوان |
iranian blood transfusion organization research center, tehran, iran
سازمان اصلی تایید شده: سازمان انتقال خون ایران (Blood transfusion research center)

سیامک میراب سمیعی | mirab samiee
food and control research laboratories, tehran, iran

محسن کریمی ارزنانی | karimi arzanani
department of genetics, karolinska university, sweden

رامین نقی زاده |
day general hospital laboratory, tehran, iran

نشانی اینترنتی http://mjms.modares.ac.ir/article_6083_00b3d952bf8fd629902bc7a1f4386521.pdf
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات