این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش در پزشکی، جلد ۳۴، شماره ۲، صفحات ۱۲۳-۱۲۷
عنوان فارسی بیـان پروتئین نوترکیب غنی از سـرین انتـامبا هیستولیتیکا
چکیده فارسی مقاله چکیده سابقه و هدف: استفاده از شاخص های آنتی ژنیک انتامباهیستولیتیکا مانند آنتی ژن پروتئین غنی از سرین انتامباهیستولیتیکا SREHP)) جهت تهیه واکسن، برسی تنوع ژنتیکی و تشخیص قطعی و افتراق آن از انتامبا دیسپار کاربرد بیشتری پیدا کرده است. این مطالعه با هدف بیان پروتئین نوترکیب غنی از سرین انتامبا هیستولیتیکا به منظور استفاده در کیت تشخیصی الایزا انجام شد. روش بررسی: در این تحقیق که یک روش توصیفی از نوع اکتشافی است، ابتدا ژن SREHP ایزوله ایرانی که قبلاً در پلاسمید بلواسکریپت (pBSc) کلون شده بود، با استفاده از آنزیم BamHI جدا گردید و پس از تخلیص از ژل در پلاسمید بیانی pET32a کلون شد. از روش های غربالگری شامل روش سریع (Quick check) با استفاده از محلول Rosconis، PCR با پرایمرهای اختصاصیSREHP و pET و برش آنزیمی با آنزیم های BamHI و HindIII جهت تایید کلونینگ استفاده شد. ترادف نوکلئوتیدهای ژن با روش سکوئنسینگ تعیین گشت و پلاسمید نوترکیب حاوی ژن SREHP جهت تکثیر به سلول پذیرای BL21(DE3) انتقال یافت. در نهایت ازکلنی حاوی پلاسمید نوترکیب کشت انبوه تهیه شد و پروموتور ژن با IPTG القا و وجود پروتئین نوترکیب برروی ژل SDS-PAGE بررسی گردید. یافته ها: ژن SREHP در پلاسمید بیانی pET32a ساب کلون گردید و صحت کلونینگ با روش های غربالگری سریع (Quick check)، PCR با پرایمر های اختصاصیSREHP و pET T7 promoter و برش آنزیمی با آنزیم های BamHI و HindIII تایید شد. ترادف نوکلئوتیدهای ژن با اندازه 666 نوکلئوتید تعیین گشت و ژن کلون شده در پلاسمید بیانی در حضورIPTG در مدت زمان 5 ساعت در محیط کشت ابراز شد. وجود پروتئین نوترکیب غنی از سرین انتامبا هیستولیتیکا به انضمام تیوردوکسین (Trx-Tag) موجود درpET32a با وزن ملکولی 44 کیلودالتونی در کنار مارکر برروی ژل SDS-PAGE مشاهده و مورد تایید قرار گرفت. نتیجه گیری: با توجه به کاربرد زیاد پروتئین نوترکیب غنی از سرین انتامباهیستولیتیکا در تهیه کیت های تشخیصی و تهیه واکسن از آن علیه تک یاخته انتامباهیستولیتیکا، در این مطالعه پروتئین سرین ریچ (SREHP) با موفقیت بیان شد. واژگان کلیدی: انتامبا هیستولیتیکا، پروتئین نوترکیب غنی از سرین، SREHP.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله انتامبا هیستولیتیکا، پروتئین نوترکیب غنی از سرین، SREHP.
عنوان انگلیسی Expression of a recombinant serine-rich Entamoeba histolytica protein (SREHP)
چکیده انگلیسی مقاله Abstract Backgraound: Entamoeba histolytica antigenic markers such as Serine-Rich E. histolytica protein (SREHP) have recently been used for vaccine preparation, genetic diversity studies of Entamoeba histolytica isolates and for differentiation between E. histolytica and E. dispar species. This study was carried out with the aim of expression of a recombinant Serine Rich E. histolytica protein in the laboratory to use it in the ELISA kit. Methods: In this study which is an exploration method, an Iranian isolate of Serine-Rich E. histolytica gene which had previously been cloned in bluescript plasmid (pBSc), was cut using BamHI restriction enzyme. After extracting and purification from gel, the SREHP gene was sub cloned into pET32a expression vector. The inserted gene was confirmed with Rosconis solution, PCR and sequencing methods. PCR was performed with the SREHP specific primers as well as pET T7 promoter primer. The cloned gene was also digested with HindIII and BamHI restriction enzymes. Recombinant plasmid was conveyed to competent cell BL21 (DE3). A colony of the plasmid including SREHP gene was cultivated and induced with IPTG. The result of expressed protein was observed on the SDS-PAGE gel. The SREHP gene was sub cloned into pET32a expression vector. A recombinant plasmid including an inserted SREHP gene was screened and confirmed with quick check method using Ruscoins solution, as well as PCR by special primers (SREHP and universal pET primer), digested with BamHI and HindIII restriction enzymes. Finally an open reading frame of 666 nucleotides from inserted SREHP gene was obtained with the sequencing method. Results: The recombinant protein of Serine-Rich E. histolytica in presence of IPTG was expressed in five hours and the result of expressed protein in the length of 44 KDa was observed on SDS-PAGE gel. Conclusion: SREHP protein was successfully cloned and expressed in this study. However additional studies are recommended for preparation and purification of the SREHP in a large quantity and the using it for the ELISA test. Keywords: Entamoeba histolytica, Recombinant Protein, Serine rich, SREHP.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله شهرام نکوییان | shahram nekoeian


علی حقیقی | ali haghighi


بهرام کاظمی | bahram kazemi


سیدجواد سید طبایی | seyyed javad seyyed tabaei


نیلوفر تقی پور | niloofar taghipour


سیما راستی | sima rast


نشانی اینترنتی http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-518&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده انگل شناسی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات