این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
پژوهش در پزشکی، جلد ۳۰، شماره ۳، صفحات ۲۴۵-۲۵۲
عنوان فارسی استرپتوکیناز: استخراج،کلون‌سازی و بیان بالای پروتئین نوترکیب فعال
چکیده فارسی مقاله چکیده سابقه و هدف: استرپتوکیناز به عنوان شناخته‌شده‌ترین داروی فیبرینولیتیک، مدت مدیدی است در درمان سکته قلبی استفاده می‌شود. ویژگیهای ساختاری ساده این پروتئین زمینه لازم برای دستیابی به انواع نوترکیب آن را فراهم ساخته است. هدف از این تحقیق تهیه سوش استرپتوکوک equisimilis H46A (پربازده از نظر تولید استرپتوکیناز) برای اولین بار در ایران بود تا پس از استخراجDNA ، ژن استرپتوکیناز بگونه‌ای تکثیر شود که امکان کلون‌سازی آن در حاملهای متعدد بوجود آید. روش بررسی: پس از استخراجDNA ژنومی ژن استرپتوکیناز از دو ناحیه با استفاده از دو پرایمر بالادست و یک پرایمر پایین‌دست ضمن در نظر گرفتن یک جایگاه آنزیم برش‌دهنده معمول برای دو سر محصولات (کل ORF، bp 1323 و قسمت مربوط به پروتئین بالغ، bp 1245) تکثیر شد و در حامل pGEX-4T-2 تحت پروموتور قوی t‏ac و قابلیت بیان بالا کلون شد. پلاسمید نوترکیب حاصل بوسیله عملیات هضم دو طرفه و تعیین توالی، تأیید و در اشریشیاکلی سویهBL21(DE3 )plysS´ ترانسفورم شد. میزان بیان و فعالیت استرپتوکیناز نوترکیب مربوط به کلون واجد قطعه bp1245 با استفاده از دانسیتومتر لیزری و تست اختصاصی با سوبسترایS2251 در مقایسه با یک نمونه استرپتوکیناز خارجی مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته‌ها: استفاده از یک آنزیم برش‌دهنده برای دو سر قطعه ژن، کلون‌شدن آن‌را در تعداد زیادی از حاملهای بیانی امکان‌پذیر ساخت. میزان بیان پروتئین نوترکیب به بیش از 45% کل پروتئینهای میزبان، موفقیت در کلون‌سازی را تأیید کرد. وجود دم اتصالی گلوتاتیون S ترانسفراز(GST) مانع فعالیت استرپتوکیناز نشد و مقدار آن بدون بهینه‌سازی و تخلیص شرایط کشت بیش از u/ml15000از کشت ثبت شد. نتیجه‌گیری: استفاده از حاملpGEX-4T-2 ضمن تولید استرپتوکیناز نوترکیب فعال و با بازدهی فراوان، دم GST را نیز به ابتدای آمینی آن اضافه می‌کند که می‌توان از آن برای تخلیص یک مرحله‌ای و آسان با استفاده از لیگاند گلوتاتیون سود برد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله ،pGEX-4T-2، استرپتوکیناز،کلون‌سازی، پروتئین نوترکیب، تخلیص.
عنوان انگلیسی Streptokinase: extraction, cloning and overexpression of recombinant
چکیده انگلیسی مقاله Abstract: Background: Streptokinase has been widely prescribed as a fibrinolytic agent for myocardial infarction. Simple structural characteristics of this protein have provided techniques for production of different recombinant types of this protein. The present study was designed to prepare equisimilisH46A subtype of streptokinase in our country. Materials and methods: Having extracted the DNA, the streptokinase gene was replicated and cloned in pGEX-4T-2. The recombinant product was transformed in BL21(DE3)plysS'. Then the recombinant streptokinase expression and performance was assessed by lasic densitometry and special test for S2251 substrate. Results: Use of a restriction enzyme for both sides of a gene may facilitate its cloning in different expressive carriers. Expression rate of recombinant protein (45%) confirmed successful cloning. Conclusions: Use of pGEX-4T-2 carrier was not only associated with active recombinant streptokinase production, added GST to its amine ending that could facilitate purification process.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله محمدرضا نژاد مقدم | mr nejad moghaddam
research center for biologic nanotechnology, avesina research institute for modern medical science, tehran
مرکز تحقیقات نانوتکنولوژی زیستی، پژوهشکده فن آوری های نوین علوم پزشکی جهاد دانشگاهی ابن سینا، تهران

سیدمحمدحسین مدرسی | mh2 modarresi
2research center for reproductive biotechnology, avesina research institute for modern medical science, tehran
مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی تولیدمثل، پژوهشکده فن آوری های نوین علوم پزشکی جهاد دانشگاهی ابن سینا، تهران

محمد باباشمسی | m3 babashamsi
3research center for monoclonal antibody, avesina research institute for modern medical science, tehran
مرکز تحقیقات آنتی بادی منوکلونال، پژوهشکده فن آوری های نوین علوم پزشکی جهاد دانشگاهی ابن سینا، تهران

محمود چمن خواه | m3 chamankhah


نشانی اینترنتی http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-305&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده عمومی
نوع مقاله منتشر شده پژوهشی
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات