این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
زیست فناوری، جلد ۹، شماره ۲، صفحات ۰-۰
عنوان فارسی بیان، تخلیص و تعیین خصوصیات دومین متصل‌شونده به IP۳ نوع ۲ انسانی
چکیده فارسی مقاله اهداف: IP3 یک مولکول کلیدی تنظیم‌کننده در مسیر انتقال پیام است و با اتصال به گیرنده‌های درون‌سلولی IP3R روی سطح ذخایر کلسیم داخل‌سلولی باعث آزادسازی کلسیم به درون سیتوپلاسم می‌شود. هدف این پژوهش، بیان، تخلیص و تعیین خصوصیات دومین متصل‌شونده به IP3 )IP3BD:1-604 aa( نوع 2 انسانی بود. مواد و روش‌ها: در پژوهش تجربی حاضر، پلاسمید pET-28a حامل ژن IP3BD با روش شیمیایی به داخل باکتری‌های بیانی E.coli سویه BL21) DE3( منتقل شد. برای بهینه‌سازی بیان در سیستم باکتریایی، بیان در شرایط مختلف مورد بررسی قرار گرفت و دماهای بیان مختلف از جمله 16، 18، 20 و C24º، زمان‌های مختلف بعد از القا، نوع القاکننده و غلظت‌های مختلف آن بررسی شد. باکتری‌های القاشده براساس شوک حرارتی از طریق کروماتوگرافی تمایلی ستون نیکل- سفارز تخلیص و میزان خلوص پروتئین از طریق SDS-PAGE بررسی شد. نشر فلورسانس دومین متصل‌شونده به IP3 در حضور و عدم حضور لیگاند IP3 در طول موج 295نانومتر اندازه‌گیری شد. یافته‌ها: پروتئین در محیط‌های LB و TB و 2xYT بیان قابل توجهی نداشت و در زمان‌های مختلف تغییری در آن مشاهده نشد. بیان پروتئین باکتری در دمای C20º براساس شوک حرارتی C42º نسبت به تمام حالات بیشتر بود. تخلیص باکتری‌های القاشده براساس شوک حرارتی به‌سختی تکرار می‌شد و نمونه‌های خالص‌شده نیز غلظت بالایی نداشتند. نشر فلورسانس پروتئین در حضور لیگاند IP3 کاهش یافت. نتیجه‌گیری: بیان باکتریایی دومین متصل‌شونده به IP3 از گیرنده نوع 2 گونه انسانی ضعیف است، ولی با القای شوک Cº42 بیان پروتئین تا حدود نسبتاً زیادی افزایش می‌یابد.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله گیرنده اینوزیتول‌تری‌فسفات، بیان، فلورسانس ذاتی، لیگاند
عنوان انگلیسی Expression, Purification, and Characterization of IP3-binding Domain from Human Type 2
چکیده انگلیسی مقاله Aims: IP3 is a key regulator molecule in the message transmission pathway, and releases calcium into the cytoplasm by binding intracellular IP3R receptors on the surface of the internal calcium stores. The aim of this study was expression, purification, and characterization of IP3-binding domain from human type 2. Materials and Methods: In this experimental study, the pET-28a plasmid of the carrier of the IP3BD gene was transferred to the E.coli expression strain BL21 (DE3) by chemical method. In order to optimize the expression in the bacterial system, the expression was studied in different conditions, and various temperatures such as 16, 18, 20, and 24°C, the different times after incubation, type of inducer, and its different concentrations were investigated. The induced bacteria were purified on the basis of thermal shock through nickel column for chromatography and the purity of the protein was measured through SDS-PAGE. The fluorescence emission of IP3-binding domain was measured in the presence and absence of an IP3 ligand at wavelength of 295nm. Findings: Protein did not have a significant expression in LB, TB, and 2xYT environments, and no changes were observed at different times. Expression of bacterial protein at 20°C based on thermal shock of 42°C was higher than in all cases. The purification of the induced bacteria was difficultly repeated due to thermal shock, and the purified samples did not have high concentrations. The fluorescence emission of the protein decreased in the presence of the IP3 ligand. Conclusion: The bacterial expression of IP3-binding domain from human type 2 is weak, but the expression of protein increases with the induction of shock of 42°C.  
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله مرضیه نخعی امرودی | M. Nakhaei Amroudie
Biochemistry Department, Biological Sciences Faculty, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

فرنگیس عطائی | F. Ataei
Biochemistry Department, Biological Sciences Faculty, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

نشانی اینترنتی http://journals.modares.ac.ir/browse.php?a_code=A-1-2-84&slc_lang=other&sid=22
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده other
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات