این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
فصلنامه پژوهشی خون، جلد ۱۲، شماره ۲، صفحات ۱۰۱-۱۱۰
عنوان فارسی همسانه‌سازی ژن SOX۲ انسانی در ناقل لنتی ویروسی و القای ژنی در سلول‌های HEK۲۹۳T
چکیده فارسی مقاله چکید ه سابقه و هدف ژن SOX2 در میان گونه‌ها، حفاظت شده بوده و از فاکتورهای مهم در القای سلول‌های پیش‌ساز از سلول‌های تمایز یافته می‌باشد که موجب حفظ خاصیت پرتوانی سلول‌های پیش‌ساز می‌شود. SOX2 ، OCT4 ، cMYC و KLF4 سبب باز برنامه‌نویسی سلول‌های سوماتیک به سلول‌های بنیادی می‌شوند. امروزه از ژن SOX2 در جهت تولید سلول­های iPS و سلول درمانی استفاده می‌شود. در این تحقیق همسانه‌سازی ژن SOX2 در ناقل لنتی ویروس و آلوده‌سازی سلول‌های HEK293T بررسی شد. مواد و روش‌ها در یک مطالعه تجربی، توالی کدکننده ژن SOX2 سنتز و در ناقل همسانه‌سازی pUC57 دریافت گردید. ژن ساختـه شده در ناقل بیانی لنتی ویروس pLEX-MCS ساب ـ کلون شد. سازه نوترکیب توسط روش‌‌های PCR ، هضم آنزیمی و توالی‌یابی تایید شد. ذرات لنتی ویروس در سلول‌های تولید کننده HEK293T تولید شدند. از وکتور لنتی ویروسی حاوی ژن GFP به عنوان کنترل استفاده شد. سلول‌های HEK293T توسط ذرات ویروسی آلوده شده و به وسیله مقاومت به آنتی‌بیوتیک پورومایسین انتخاب گردیدند. بیان SOX2 در سلول‌های HEK293T توسط RT-PCR بررسی شد. یافته‌ها سازه نوترکیب بیان‌کننده SOX2 ساخته و تایید گردید. سلول‌های HEK293T توسط ذرات ویروس آلوده شدند و پس از 24 ساعت، بیش از 90% سلول‌های HEK293T بیان GFP را از خود نشان دادند. با استفاده از روش RT-PCR بیان SOX2 در سلول‌های HEK293T تایید شد. نتیجه گیری سلول‌های HEK293T با موفقیت سازه‌های نوترکیب را دریافت و ژن‌های GFP و SOX2 را بیان نمودند.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Cloning of human SOX2 in lentiviral vector and transduction of HEK293T cell line
چکیده انگلیسی مقاله Abstract Background and Objectives Recently the regenerative stem cell-based therapy has held great promise in treating severe degenerative diseases. SOX2 gene is highly conserved among species and plays an important role in maintenance of self renewal capacity in stem cells. SOX2 concomitant with OCT4, cMYC, and KLF4 is recruited to reprogram somatic cells towards stem cells. Today SOX2 is frequently being used in induced pluripotent stem cells generation and desired cell based therapies. The aim of this study was to clone SOX2 gene in lentiviral vector and evaluate HEK293T transduction. Materials and Methods In the present experimental study, the coding sequence of human SOX2 gene was synthesized and received in pUC57 cloning vector. The synthesized cDNA was sub-cloned into pLEX- MCS Lentiviral vector. Lentiviral particles were produced in HEK293T cells and subsequently the HEK293T were transducted and infected cells were selected by their resistance to puromycin in the culture. Expression of SOX2 was evaluated in infected HEK293 cells by using Real-Time PCR. Results Constructs expressing SOX2 gene were produced and confirmed. HEK293T was successfully transducted by lentiviral particles and after 24 hours more than 90% of HEK293T represented the expression of GFP. Real-Time PCR confirmed SOX2 expression in infected HEK293 cells. Conclusions HEK293T wase transducted and expressed GFP and SOX2 successfully.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله انسیه درباری | e. darbari
پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و تکنولوژی زیستی
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

زهرا سهیلا سهیلی | z s soheili
استادیار پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و تکنولوژی زیستی
سازمان اصلی تایید شده: پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

نشانی اینترنتی http://www.bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-708-1&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده biotechnology|
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات