این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
فصلنامه پژوهشی خون، جلد ۸، شماره ۲، صفحات ۹۶-۱۰۳
عنوان فارسی کلون‌سازی و مطالعه بیان فاکتور بافتی نوترکیب در سلول‌های یوکاریوتیک CHO
چکیده فارسی مقاله چکید ه سابقه و هدف فاکتور بافتی( TF )، اصلی‌ترین آغازکننده آبشار انعقادی است. برای بررسی مسیر خارجی انعقاد، اندازه‌گیری زمان پروترومبین بهترین روش است که در این روش با توجه به TF به کار گرفته شده، نوساناتی در نتیجه آزمایش دیده می‌شود. در این مطالعه با هدف دستیابی به نتایجی با تکرارپذیری بیشتر، از TF نوترکیب استفاده شده است. مواد و روش‌ها مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. cDNA فاکتور بافتی در پلاسمید pcDNA3.1 کلون و به سلول‌های CHO منتقل گردید. پروتئین‌های سلول‌های CHO ترانسفکت شده استخراج و پس از جداسازی با روش SDS-PAGE با وسترن بلات آنالیز شدند. سلول‌های CHO که TF را بیان می‌کردند در حضور کلروکلسیم به پلاسمای سیتراته افزوده شدند و زمان لخته شدن پلاسما ثبت گردید. فعال‌سازی فاکتور VII در پلاسما با روش الایزا مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها در آنالیز پروتئین‌های جدا شده از سلول های ترانسفکت شده با روش SDS-PAGE ، باندی حدود 40 کیلودالتون مشاهده شد که با آنتی‌بادی مونوکلونال TF در آنالیز وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. زمان انعقاد پلاسما در مقایسه با سلول‌های CHO ترانسفکت نشده, از 3 دقیقه به 3 ± 21 ثانیه کاهش یافت. هم چنین اضافه کردن غشای این سلول‌ها به پلاسما در حضور کلرور کلسیم، موجب فعال‌سازی فاکتور VII به میزان ng/ml 35 ±810 شد. نتیجه گیری TF نوترکیب بیان شده در سلول‌های CHO ، قادر به لخته کردن پلاسمای سیتراته و فعال سازی فاکتور VII بود.
کلیدواژه‌های فارسی مقاله سلول‌های CHO، فاکتور VII، زمان پروترومبین
عنوان انگلیسی Cloning and expression of recombinant tissuefactor in CHO cells
چکیده انگلیسی مقاله Abstract Background and Objectives Tissue factor (TF), a 45-kDa transmembrane glycoprotein, is the major cellular initiator of the coagulation cascade. Prothrombin Time (PT) is the test that evaluates extrinsic pathway of coagulation. Thromboplastin used in this test is mostly prepared of rabbit brain. Thus it causes variation in the PT results. There is an important advantage of using recombinant TF in PT test to get more reproducible results. Materials and Methods TF mRNA was isolated from human lung fibroblast cells. After preparation of cDNA it has cloned in pcDNA3 plasmid. CHO cells were transfected with recombinant plasmid. Transfected cells were grown in presence of Geneticin. Total proteins were extracted from CHO cells and separated with SDS/PAGE electrophoresis and analyzed by western blotting technique. CHO cells expressing TF were added to citrated plasma in presence of Cacl2 and clotting time was measured. In addition, factor VII activation by recombinant TF in the plasma was assessed by ELISA method. Results Extracted proteins from tarnsfected CHO cells separated on SDS/PAGE showed an approximately 40-kDa band that verified with a monoclonal antibody against TF on western blot analysis. Adding transfected cells (106cell/ml) to the citrated plasma in presence of Cacl2 could decrease clotting time from 3 minutes to 21 ± 3 seconds compared with untransfected CHO cells. The level of factor VIIa in citrated plasma was 810 ± 35 ng/ml in presence of transfected cells’ membrane. Conclusions Recombinant TF expressed in CHO cells was able to clot citrated plasma and to activate factor VII.
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله CHO cells, Factor VII, Prothrombin Time
نویسندگان مقاله مونا خورشیدفر | m. khorshidfar
مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون

ناصر امیری زاده | n. amirizadeh
استادی ـار مـرکز تحقیقـــات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشـی طـب انتقـ ـال خـ ـون

مهریار حبیبی رودکنار | m habibi roudkenar
دانشیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون

نشانی اینترنتی http://www.bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-231&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده biotechnology|
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات