این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
فصلنامه پژوهشی خون، جلد ۲، شماره ۶، صفحات ۲۲۳-۲۳۱
عنوان فارسی همسانه سازی، بهینه‌سازی شرایط بیان، تخلیص و ارزیابی خواص ایمونولوژیک بخش هیدروفیلیک آنتی‌ژن Core ویروس هپاتیت C، ابراز شده تحت پروموتر T۷-araBAD در E.coli
چکیده فارسی مقاله چکید ه سابقه و هدف آنتی‌ژن Core ویروس هپاتیت C ، یک پروتئین چندکاره با ارزش‌های ویژه در اهداف تشخیصی و تحقیقات پاتوفیزیولوژیک می‌باشد. اکثر این خواص مربوط به بخش هیدروفیل (آمینو اسید: 122-2) این آنتی‌ژن بوده و دسترسی به روشی برای تولید مقادیر انبوه از این پروتئین در فرم خالص و طبیعی، از اهمیت به سزایی برخوردار است. به این جهت با هدف همسانه‌‌سازی(کلونینگ ژن)، ابراز پروتئین با بازدهی بالا، تخلیص در فرم طبیعی و ارزیابی خواص ایمونوژنیک این بخش از پروتئین Core ویروس هپاتیت C در یک سیستم پروموتری T7 تحت القا آرابینوز، مطالعه حاضر صورت پذیرفت. مواد وروش‌ها در این مطالعه تجربی، از روش PCR برای جداسازی ژن و از حامل pIVEX2.3 جهت کلونینگ ژن با استفاده از روش‌های مهندسی ژنتیک استفاده شد. آنالیزهای پروتئین توسط SDS-PAGE ، وسترن بلات و الیزا بر روی سرم بیماران HCV مثبت انجام شد و تخلیص پروتئین به روش کروماتوگرافی جذبی بر روی نیکل (Ni-NTA) صورت پذیرفت. یافته‌ها ژن مربوط به بخش هیدروفیل HCV Core با موفقیت و با ترادف صحیح، جداسازی و به‌طور مناسب در کاست بیانی کلون گردید. سیستم القا آرابینوز به‌طور مؤثر، پس از 3 ساعت، قابلیت تولید پروتئین نوترکیب با بازدهی mg/L 5/3 را داشته و پروتئین تولید شده به سهولت و دریک مرحله قابلیت تخلیص شدن تاحدود 80 درصد بر روی ستون جذبی Ni-NTA را دارا می‌باشد. پروتئین خواص آنتی ژنیک خود را در ساختمان طبیعی حفظ می‌نماید. نتیجه گیری در این مطالعه برای اولین بار نشان داده شده که سیستم القا آرابینوز به‌طور مؤثر، قابلیت کاربرد در تولید بخش هیدروفیل پروتئین Core را دارد و پروتئین تخلیص شده، احتمالاً در شرایط طبیعی از لحاظ ایمونولوژیک، قابلیت کاربرد برای اهداف تحقیقی و تشخیصی را داراست. کلمات کلیدی : آنتی‌ژن Core ویروس هپاتیت C ، Ni-NTA ، آرابینوز، پروموتر
کلیدواژه‌های فارسی مقاله ،آنتی‌ژن Core ویروس هپاتیت C،Ni-NTA،آرابینوز،پروموتر
عنوان انگلیسی Cloning, optimization of expression condition, purification and immunological characterization of hydrophilic section of HCV core Ag, expressed in E.coli by T7-araBAD promoter
چکیده انگلیسی مقاله Abstract Background and Objectives The capsid or core Ag of Hepatitis C virus is a multifunctional protein which has the principal pathogenesis and diagnostic role in HCV related infections and most of these properties are attributed to the hydrophilic section (amino acids 2-122) of this protein. For different research and diagnostic applications, high amounts of this protein in pure and original form are required. So, the aim of this study was to clone the gene, optimize the expression condition, purify it in the original form, and immunologically characterize hydrophilic section of HCV Core Ag, expressed by T7-araBAD promoter system in E.coli. Materials and Methods The PCR amplified region corresponding to 2-122 section of this Ag from genotype Ib was cloned in pIVEX 2.3, a T7 promoter derived vector. The proper construct after digestional analysis and sequencing confirmations was transformed into BL21-AI E.coli, and protein expression under control of araBAD promoter by addition of 0.2% Arabinose was induced. Results After optimization of expression condition, purification of protein by NI-NTA agarose gel chromatography in native condition by immidazole yielded about 3.5mg/L of HCV core Ag. Immunological studies by western blotting through application of core specific mAbs and results of ELISA tests indicated that the protein is with desired immunological properties. Conclusions AraBAD promoter can be perfectly utilized to produce the hydrophilic section of HCV core in high yields, and purification through NI-NTA in native condition may provide the antigen for different research and diagnostic applications. Key words : Hepatitis C core Antigen, Arabinose, NI-NTA, Promoter 
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله Hepatitis C core Antigen, Arabinose, NI-NTA, Promoter
نویسندگان مقاله محمدرضا آقا صادقی | mohammad reza aghasadeghi m r
انستیتو پاستور ایران

سید مهدی سادات | seyed mehdi sadat s m
انستیتو پاستور ایران

دکتر صفیه امینی | mohammad safieh amini s
انستیتو پاستور ایران

دکتر آگاتابود کوسکا | mohammad آگاتابود budkowska a
انستیتو پاستور ایران

دکتر فرزین روحوند | roohvand f
انستیتو پاستور ایران

نشانی اینترنتی http://www.bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-85&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات