این سایت در حال حاضر پشتیبانی نمی شود و امکان دارد داده های نشریات بروز نباشند
فصلنامه پژوهشی خون، جلد ۱، شماره ۲، صفحات ۱۱-۱۷
عنوان فارسی تولید آلبومین سرم انسانی نوترکیب در مخمر متیلوتروف هانسونلا پلی مورفا
چکیده فارسی مقاله چکید ه سابقه و هدف ‌ آلبومین عمده‌ترین پروتئین پلاسما می‌باشد. این پروتئین نه تنها به عنوان حامل بسیاری از ماکروملکول‌ها در بدن نقش عمده‌ای ایفا می‌کند بلکه نقش مهمی در تنظیم فشار اسمزی دارد. امروزه از آلبومین در درمان خونریزی‌ها و سوختگی‌های شدید و هم‌چنین در درمان افراد مبتلا به کمبود آلبومین استفاده می‌شود. مصرف سالیانه آلبومین در دنیا حدود 450 تن می‌باشد. به‌منظور برطرف کردن این نیاز و تولید آلبومین عاری از هرگونه آلودگی از روش‌های بیوتکنولوژی استفاده گردیده است. در این تحقیق از مخمر هانسونلا پلی مورفا که امروزه در سطح وسیعی به ‌منظور تولید پروتئین‌های هترولوگ به‌کار برده می‌شود،‌ برای آلبومین انسانی نوترکیب استفاده گردیده است. مواد وروش‌ها مطالعه انجام شده از نوع تجربی (experimental) است. به‌منظور تولید پروتئین آلبومین نوترکیب و هم‌چنین بهینه ‌سازی شرایط تولید از سوش RB-11 هانسونلا پلی ‌مورفا به ‌عنوان میزبان استفاده گردید. پلاسمید pFMPT-MFα حاوی cDNA آلبومین تحت کنترل پروموتور FMD با استفاده از روش الکتروپوریشن داخل میزبان شد و سپس تحت شرایط مختلف با بررسی پارامترهایی نظیر زمان انکوباسیون، محیط کشت، دما و مهارکننده‌های پروتئازی بیان آلبومین مورد بررسی قرار گرفت. آلبومین تولید شده با روش‌هایی هم‌چون الایزا، HPLC و Western Blot ارزیابی شد. یافته‌ها درطی این تحقیق چهارعامل مهم دربیان پروتئین آلبومین موردمطالعه قرارگرفت ومشخص گردید که از بین سه محیط derepression ، YNB 1% Glycerol ، YP 1% Glycerol ،‌ YNB 1% Glycerol with buffer ، محیط کشت YNB 1% Glycerol with buffer و از بین سه دمای 25،‌30 و37 درجه سانتی گراد دمای 37 درجه و از بین سه زمان انکوباسیون، 24، 48 و 72 ساعت، مدت 48 ساعت با حضور آنتی ‌پروتئازها بیشترین میزان تولید آلبومین به‌دست آمد. نتیجه گیری بالاترین میزان تولید شده تحت شرایط بهینه به‌دست آمده در مقیاس آزمایشگاهی، mg/l 6/17 را نشان داد. از سوی دیگر با استفاده از این سوش در شرایط نیمه صنعتی، میزان mg/l 478 آلبومین تولید شد و این امر نشان‌دهنده آن است که می‌توان تولید پروتئین آلبومین را در شرایط انبوه ادامه داد. کلمات کلیدی: آلبومین سرم انسانی، مخمر هانسونلاپلی مورفا، آلبومین نوترکیب
کلیدواژه‌های فارسی مقاله
عنوان انگلیسی Expression of recombinant human serum albumin in the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha
چکیده انگلیسی مقاله Abstract Background and Objectives Human serum albumin (HSA) is the major protein component of human plasma. I t plays a very important role in transporting of macro molecules and maintaining the normal osmolarity. It is used as a therapeutical protein in patients with hypoalbuminemia and acute bleeding and burning. Albumin consumption in the world is about 500 ton/year. The aim of this research is to study the production of rHSA in shake flask culture by Hansenula polymorpha. Materials and Methods H. polymorpha was used for the production of recombinant human serum albumin (rHSA) in several of shake flask culturing expression of rHSA was investigated relating several parameters affecting the expression of HSA. To optimize the secretory expression of rHSA under the control of FMD promoter in H. polymorpha RB-11 incubation time, culture media temperature and protease inhibitors were analyzed . Results This study not only established production of rHSA in yeast but also analyzed the correlation between affecting parameters and the level of HSA expression. Comparison of the HSA levels in the culture supernatants showed that the highest HSA yield was 17.6mg/l. The research shows that among three different temperatures (25oC,30oC and 37oC) 37oC was the best temperature and amongst three different incubation times (24h,48h and 72h) 48h was the optimum time and YNB 1% glycerol with buffer was the best derepression medium in comparison with others. Conclusions Using these optimized conditions, stable production of rHSA of around 17.6mg/l was achieved. Our results suggest that affecting experssion factors improved in this study are suitable for production of recombinant albumin. Key words: Hansenula polymorpha, Yeast, Human serum albumin, Affecting factors 
کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله
نویسندگان مقاله لیا عباسی محب | l abbasi moheb
دانشگاه علوم بهزیستی و توانبخشی

مهدی منتظر حقیقی | m m haghighi
دانشگاه علوم بهزیستی و توانبخشی

علیرضا قمری | a r ghamari
مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران
سازمان اصلی تایید شده: سازمان انتقال خون ایران (Blood transfusion research center)

بهزاد ادیبی مطلق | b adibi motlagh
مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران
سازمان اصلی تایید شده: سازمان انتقال خون ایران (Blood transfusion research center)

دکترحوری رضوان | h. rezvan
مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران، بخش تحقیق و توسعه
سازمان اصلی تایید شده: سازمان انتقال خون ایران (Blood transfusion research center)

دکترمایکل پوینتک | m. piontek
دانشگاه دوسلدورف آلمان

دکتراستفان هل وگ | s. hellweg
مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران
سازمان اصلی تایید شده: سازمان انتقال خون ایران (Blood transfusion research center)
سازمان های دیگر: دانشگاه تربيت مدرس

دکترعلی اکبر پور فتح الله | a a pourfathollah
مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران
سازمان اصلی تایید شده: سازمان انتقال خون ایران (Blood transfusion research center)
سازمان های دیگر: دانشگاه تربيت مدرس

دکترکیمیا کهریزی | k. kahrizi
دانشگاه علوم بهزیستی و توانبخشی

دکترحسین نجم آبادی | h. najmabadi
دانشگاه علوم بهزیستی و توانبخشی

نشانی اینترنتی http://www.bloodjournal.ir/browse.php?a_code=A-10-1-10&slc_lang=fa&sid=fa
فایل مقاله فایلی برای مقاله ذخیره نشده است
کد مقاله (doi)
زبان مقاله منتشر شده fa
موضوعات مقاله منتشر شده
نوع مقاله منتشر شده 1
برگشت به: صفحه اول پایگاه   |   نسخه مرتبط   |   نشریه مرتبط   |   فهرست نشریات